紫外分光光度法测定蛋白质的含量
掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法
蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸,使蛋白质对
在一定的范围内蛋白質溶液的吸光值与其浓度成正比,可作定量测定该法操
并且测定的样品可以回收,低浓度盐类不干扰测定故在蛋白质和酶的生化
制备Φ广泛被采用。但此方法存在以下缺点:
.当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差故该法适
用于测定與标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。
吸收的物质如核酸等化合物就会出现较大的干扰。但核
两处的光吸收值通过计算可以适
当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。
但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不
同的虽经校正,测定结果还存在着一定的误差
.標准蛋白质溶液:准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白,配制成浓度为
.待测蛋白溶液:酪蛋白稀释溶液使其浓度在标准曲线范围內。
处测定各管的吸光值以蛋白质的浓
度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制出prp血清蛋白是什么的标准曲线。
下测定其吸光度值并从标准曲