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银杏叶提取液及注射剂的微乳薄层色谱分析法研究
作者：刘珍
【关键词】& TLCS,指纹图谱
　　【摘要】 目的& 研究建立银杏叶提取液及注射剂的微乳薄层色谱分析法。 方法& 采用微乳液薄层色谱展开，照相 数字图像软件获取轮廓积分图，及CAMAG薄层色谱扫描仪积分2种方法分析结果。 结果& 与有机展开剂相比，微乳展开剂获得的色谱斑点不扩展，分离效果显著提高。数字图像软件获得的色谱轮廓与薄层色谱扫描仪获得的轮廓基本一致。 结论& 银杏叶的微乳薄层色谱分离度好，能提供较多的化学信息，能反映银杏叶原料与制剂间的关系，方法稳定，可作为银杏叶注射剂质量控制中指纹图谱建立的参考方法。
　　【关键词】& 银杏叶 微乳 TLCS 指纹图谱
　　　Study of microemulsion TLC detection of ginkgoleaves extractand injection solution
　　 Liu Zhen，Liang Bing，Zhao Zhigang，et al.
　　Chemical School，Sichuan University，Chengdu610065.
　　【Abstract】 Objective To built a microemulsion-TLC detection method for Ginkgoleaves extract and injec-tion.Methods We used microemulsion as an eluent on a polyamide film，took photos of TLC by a digital camera，then got chromatographicprofiles by a digital-imaging software，and scanned the developed TLC film by CAMAGTLC3scanner.Results Compared with a general mobile phase，a microemulsion improved obviously separation efficacy.Chromatographic profiles obtained by a digital imaging software were much similar to those obtained by CAMAG TLC3scanner.Conclusion The microemulsion TLC of Ginkgoleaves could reveal the relation between the herb and its in-jection，with good separation and reliability，gave reference to the construction of fingerprint in quality control.
　　【Key words】 ginkgoleaves microemulsion TLC fingerprint
　　薄层色谱的展开剂多为有机溶剂，而微乳液作为新的展开剂，分离效果好，斑点多而清晰、不拖尾、Rf大于0.8的组分斑点不扩散，Rf小于0.2的组分仍能清楚辨认 ［1］ 。微乳液还能增强斑点的荧光强度，提高灵敏度。已应用于氨基酸 ［1］ 及黄酮类成分分析 ［2］ 。
&&&　 经典的薄层色谱靠目视进行半定量分析，或刮下斑点，用溶剂溶出组分，再作定量测定，操作繁琐，误差大。薄层扫描色谱解决了上述问题，定量的准确度、精密度明显提高。但专业薄层扫描色谱仪昂贵，国内还未能普及。而性能良好、价廉的办公扫描仪和数码相机，结合数字图像技术，就可解决平面图像的数字化。我们基于数字图像技术、开发了利用办公扫描仪或数码相机进行平面色谱定性、定量分析的数字图像软件 ［3］ ，已为实际应用证明 ［4～6］ ;改进后的软件 ［7，8］ 还能进行中药平面色谱指纹图谱相似度的计算与评价、点阵图像测定。
　　银杏叶提取物具有扩张血管，增加血流量，改善微循环，清除自由基，拮抗血小板活化因子的作用。目前报导的银杏叶注射剂指纹图谱均采用HPLC方法，未见薄层色谱指纹图谱的报导。本文研究建立银杏叶及其注射剂的微乳薄层色谱分析法，探讨其应用于指纹图谱的可能性，考察使用数字图像软件与CAMAG薄层色谱扫描仪所得扫描结果的吻合程度。
　　1 仪器和药品
　　层析缸（25×20cm 2 ）;ZF―Ⅱ型四用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）;KQ2200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;微量进样器（上海医用激光仪器厂）;色谱用聚酰胺薄膜（台州四青生化材料厂）;OLYMPUS-X-200数码相机，300万像素;CAMAG TLC SCANNER3薄层色谱扫描仪;银杏叶注射剂（黑龙江珍宝岛制药有限公司）;芦丁（中国药品生物制品检定所）;十二烷基磺酸钠（SDS），分析纯;所用溶剂均为分析纯。
　　2 方法
　　2.1 供试品的制备 银杏叶提取液供试液:参照文献 ［9］ ，1g银杏叶粉末，用50%乙醇10ml室温下超声浴提取2h，定量滤纸过滤后备用。银杏叶注射剂供试液:取银杏叶注射剂加甲醇适量备用。
　　2.2 对照品溶液制备 TLC芦丁对照溶液（1mg/ml）制备:用万分之一电子天平精密称取10mg芦丁标准对照品，以甲醇溶解，10ml容量瓶定容。
　　2.3 薄层色谱实验
　　2.3.1 微乳液展开剂的配制 按SDS、正丁醇、正庚烷的质量比为3.9∶5.2∶0.9称取各种试剂共10g，混合后加30g水搅拌溶解，静置24h制得微乳液，再加体积百分比8%的甲酸配成展开剂。
　　2.3.2 点样及展开 用微量注射器将2μl银杏叶提取液、2μl注射剂供试液及1μl芦丁对照溶液带状点样于聚酰胺薄膜上，用微乳展开剂展开8cm，1%AlCl 3 显色、晾干。
　　2.3.3 获取积分轮廓 参照中药注射剂指纹图谱研究的技术指南（试行），在365nm紫外灯下用300万像素数码相机照相，用积分软件获得荧光色谱轮廓图;或用CAMAG TLC SCANNER3扫描仪获取色谱轮廓，365nm检测波长，荧光方式，反射式直线扫描，狭缝宽5mm。
　　3 结果与讨论
　　3.1 流动相的选择 对文献报导的硅胶，传统有机展开剂的薄层色谱方法作优化，最多仅得到6个斑点。以微乳液作流动相在聚酰胺薄膜上展开，经优化最多获得了15个斑点。分离效果显著提高，斑点清晰集中，不拖尾。微乳液展开剂挥发性小，不需预饱和。微乳液结构与含水量有关。含10%和30%水时，形成水/油（W/O）型微乳液;含50%水时，为W/O型和油/水（O/W）型的混合物;含水70%以上时，为O/W型结构 ［10］ 。加入甲酸可改变展开剂的酸度及极性，试验了含水15%～90%的微乳液中分别加入体积比5%、8%、10%、15%的甲酸，发现含水75%的微乳液加入8%甲酸配成的展开剂所得的色谱展开斑点清晰集中。故选取含水75%的微乳液加入8%甲酸为展开剂。
　　3.2 斑点积分轮廓方法比较 银杏叶提取液荧光色谱积分轮廓如图1所示，CAMAG薄层扫描仪扫描得到15个峰（曲线a），其中11号峰为芦丁，7号峰为肩峰;软件积分所得轮廓（曲线b）及峰数与CAMAG的基本一致、仅7号肩峰未显现。银杏叶注射液荧光色谱积分轮廓如图2，CAMAG扫描仪扫描得到13个峰（曲线a），其中9号峰为芦丁;数字图像软件积分所得轮廓（曲线b）及峰数与CAMAG的非常接近，仅6号肩峰未显现、13号峰极弱。银杏叶提取液色谱包括了注射液所有峰，注射剂在Rf0.08和0.23处的峰比提取液弱，说明银杏叶药材与制剂间的相关性。与薄层扫描仪相比，软件法的分辨率和灵敏度略低，可能是因紫外灯单色性及强度有限。但软件法更便捷，所需设备廉价。改善灯性能便可能提高分辨率和灵敏度（图3）。
　　3.3 共有峰信息 选取分离清晰，峰高稳定的峰作为银杏叶药材和注射剂的共有峰10个（如图4）。以参照物芦丁的峰高作为1，以CAMAG扫描仪积分结果计算各共有峰的相对峰高，结果如表1。表1 银杏叶药材、注射剂共有峰参数&&& &&& 　　3.4 方法学考察 在10℃、15℃及20℃下色谱展开，所得结果各峰Rf值相一致，表明本法对温度稳定。银杏叶提取液和注射液供试液各在同一张薄膜上点6个样，荧光色谱用薄层色谱扫描仪积分，所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。银杏叶提取液和注射液供试液各在6张薄膜上点样，用薄层色谱扫描仪积分所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。取银杏叶同法6次制备提取液供试液，其荧光色谱用薄层色谱扫描仪积分所得峰的Rf值及峰高RSD<5%。本实验未能收集到不同批次的药材和制剂作评价，仅作为方法学讨论。本方法分离效率、精密度和稳定性良好，可作为建立指纹图谱的方法参考。（本文图片见附页1）
　　参考文献
　　1 田大听.一种新的展开剂用于氨基酸的薄层色谱分析.色谱，）:91.
　　2 康纯.微乳薄层色谱用于黄酮类成分分离鉴定的研究.药物分析杂志，）:121.
&&& 3 何瑾.办公用扫描仪在分析化学中应用的基础研究.四川大学学报，）:68.
　　4 雷永诚.薄层色谱法在制备光学戊醇中的应用.化学研究与应用，）:545.
　　5 毛雪华.含朱砂中成药中锌、镉、钴、镍的薄层扫描色谱.西南民族学院学报自然科学版，2004，（3）:299.
　　6 毛雪华.含朱砂中成药中汞、铜的薄层扫描色谱测定.四川化工，2004，（2）:41.
　　7 敬小丽.数字图像处理技术在平面色谱中应用的研究.西南民族学院学报自然科学版，2004，（3）:295.
&&& 8 梁冰.数字化图像处理技术在平面色谱及芯片检测中应用的研究.中国现代应用药学，）:6.
　　9 游松.银杏叶注射剂指纹图谱的研究.中草药，）:216.
　　10 梁淑芳.山楂黄酮的薄层色谱分离鉴定研究.林产化学与工业，）:86.
　　作者单位:610065四川大学化工学院（通讯作者）
　　610041西南民族大学化学与环境保护工程学院
　　（编辑一 坤）
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江苏省食品药品监督管理局关于2015年保健食品监督抽检信息的公告（第1期）
核心提示：根据《中华人民共和国食品安全法》及其实施条例、国家食品药品监督管理总局食监三司《关于转请做好2014年抽检信息公布相关事宜的通知》（食药监食监三便函〔2015〕74号）有关规定和要求，现将2015年第1期保健食品监督抽检信息予以公告。
　　根据《中华人民共和国》及其实施条例、国家药品总局食监三司《关于转请做好2014年信息公布相关事宜的通知》（食药监食监三便函〔2015〕74号）有关规定和要求，现将2015年第1期监督抽检信息予以公告。
　　本次抽检的保健食品主要包括减肥、改善睡眠、辅助降血糖、辅助降血压、辅助降血脂、缓解体力疲劳、通便、清咽等功能类别和营养素补充剂类保健食品。抽检样品涉及全国125家保健食品生产企业及我省221家保健食品经营企业的253批次样品；其中合格251批次，不合格2批次。
　　针对国家食品安全监督抽检中发现的不合格产品，我局已部署相关食品药品监管部门对不合格产品及其生产经营企业及时开展核查处置，依法立案查处，并责令违法生产经营企业及时采取下架、召回不合格产品等措施，防控食品安全风险。
　　特别提示消费者,在市场上发现被通报的抽检不合格产品时，请拨打食品药品监管部门开通的12331电话进行投诉或举报。
　　附件：1.保健食品监督抽验合格产品信息
　　2.保健食品监督抽验不合格产品信息
　　附件1.保健食品监督抽验合格产品信息
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无锡添氏保健品有限公司
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广东康富来药业有限公司
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淮安九州通医药有限公司
功效或标志性成分；有害元素（铅、砷、汞）
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先声再康（徐州）连锁药店有限公司大坝头药店
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泰州市隆泰源医药连锁有限公司高港隆泰大药房
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淮安广济医药连锁有限公司沭阳人民路药店
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吉林通化腾龙生物科技有限公司
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黑龙江齐梅生物科技股份有限公司
黑龙江省齐齐哈尔市梅里斯达斡尔族区雅尔塞镇
泰兴市润泰商业有限公司
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委托方：杭州娃哈哈集团有限公司；受托方：浙江哇哈哈昌盛罐头食品有限公司
海宁农业对外综合开发区春澜西路
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汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
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常州开古茶叶食品有限公司
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汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
灌云康盛大药房有限公司
按产品质量标准全项检验
汤臣倍健牌胶原软骨素胶囊
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
江苏益丰大药房连锁有限公司南京石门坎店
按产品质量标准全项检验
汤臣倍健牌胶原软骨素胶囊
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
江苏益丰大药房连锁有限公司南京石门坎店
按产品质量标准全项检验
汤臣倍健牌褪黑素片
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
益丰大药房（石门坎店）
汤臣倍健牌褪黑素片
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
扬州市百信缘医药连锁有限公司四季园平价店
非法添加；有害元素（铅、砷、汞）
汤臣倍健牌褪黑素片
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
扬州红太阳医药连锁有限公司运河路店
非法添加；有害元素（铅、砷、汞）
汤臣倍健牌褪黑素片
广州市佰健生物工程有限公
广东省珠海市
泰州市高港区永安药房
非法添加；有害元素（铅、砷、汞）
汤臣倍健牌鱼油牛磺酸软胶囊
汤臣倍健股份有限公司
广东省珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
镇江存仁堂医药连锁有限责任公司康复药店
按产品质量标准全项检验
汤臣倍健牌鱼油软胶囊
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
响水县康恒保健品有限公司长江药店
汤臣倍健牌左旋肉碱茶多酚荷叶片
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
常州新北区三井好邻居大药房
按产品质量标准全项检验；非法添加
汤臣倍健维生素C咀嚼片
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
苏州礼安医药连锁总店有限公司第五十六医药商店
按产品质量标准全项检验；非法添加
天狮牌卵磷脂高钙胶囊
CA4022101B
天津天狮生物工程有限公司
天津市武清开发区新源道20号
天津天狮生物工程有限公司南通分公司
有害元素（铅、砷、汞）
天天清大茶
湖南天天清茶业有限公司
长沙市开福区捞刀河镇大明村397号
先声再康（徐州）连锁药店有限公司大坝头药店
按产品质量标准全项检验
同绿牌草珊瑚胖大海含片
南昌草珊瑚实业有限公司
江西省南昌市洛阳东路（湖坊工业园）
沭阳沭城同济医药有限公司
按产品质量标准全项检验
威士雅牌惠血营养液
广东威士雅保健品有限公司
广东省潮安县庵埠威士雅大厦
如东康美大药房连锁有限公司
功效或标志性成分；有害元素（铅、砷、汞）
威士雅牌惠血营养液
广东威士雅保健品有限公司
广东省潮安县庵埠威士雅大厦
南通凌顶医疗器械科技有限公司
有害元素（铅、砷、汞）
维固康牌增加骨密度胶囊
山东明仁福瑞达制药股份有限公司
济南市高新区大正路3333号
江苏海王星辰健康药房连锁有限公司南京光华门店
功效或标志性成分
维妥立牌盾欣软胶囊
广东仙乐制药有限公司
汕头市泰山路83号
扬州市百信缘医药连锁有限公司四季园平价店
按产品质量标准全项检验
维妥立牌盾欣软胶囊
广东仙乐制药有限公司
汕头市泰山路83号
先声再康江苏药业有限公司镇江解放路药店
按产品质量标准全项检验
纤姿素牌减肥胶囊
四川德阳华美制药有限公司
德阳市西郊段家坝
溧阳国大人民药房有限公司
鑫玺牌左旋肉碱胶囊
江西兴天仁医药科技发展有限公司
樟树市福城工业园
溧阳国大人民药房有限公司
按产品质量标准全项检验；非法添加
雄纠纠益康胶囊
汤臣倍健股份有限公司
珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
宿迁市宿城区康济堂大药房
养身堂牌天然维生素C咀嚼片
海南养身堂药业有限公司
海口市金盘工业区金牛路6号P.C:570216
灌云康盛大药房有限公司
按产品质量标准全项检验
养生堂牌天然维生素C咀嚼片
海南养生堂药业有限公司
海南省海口市金盘工业区金牛路6号
泰州市高港区永安药房
按产品质量标准全项检验
养生堂牌天然维生素E软胶囊
杭州养生堂保健食品有限公司
杭州市西湖区转塘街道龙坞镇葛衙庄181号
江苏海王星辰健康药房连锁有限公司南京光华门店
功效或标志性成分
樱花牌减肥茶
常州开古茶叶食品有限公司
中国常州钟楼区新昌路166-8号
常州开古茶叶食品有限公司
按产品质量标准全项检验；非法添加
源生堂牌蜂胶软胶囊
委托企业：海南正康药业有限公司，受委托企业：佛山市南海康源胶囊技术有限公司
委托企业：海南省海口市国贸路48号新达商务大厦2108房，受委托企业：佛山市南海区狮山镇松岗石泉中桥开发区
如皋市本草大药房有限公司
劲牌有限公司
湖北省大治市大治道169号
江苏乐天玛特商业有限公司连云港苍梧路店
按产品质量标准全项检验；非法添加
2.保健食品监督抽验不合格产品信息
标称产品名称
标称批准文号
标称生产企业名称
标称生产企业地址
被抽样单位名称
被抽样单位地址
不合格项目
回春花牌减肥茶
卫食健字（2003）第0265号
辽源九快九本草茶尚健康品有限公司
吉林省辽源市人民大街连阳路52号
宿迁市玖玖药品超市连锁有限公司沭阳上海南路店
沭阳县沭城镇金港花苑商铺-2-F2-1
8.9g/100g，不符合规定
应&23.4g/100g
益备牌护肝胶囊
卫食健字（2000）第0665号
委托加工企业：南京天地集团生物工程技术有限公司
委托加工企业地址：南京高新开发区新科1路5号生物医药孵化器大楼A座101室
南京天地集团生物工程技术有限公司
南京高新开发区新科1路5号生物医药孵化器大楼A座101室
对化学性肝损伤有辅助保护作用
葛根素含量
2.3g/100g，不符合规定
应为1.6～1.9g/100g
复检结果为2.48g/100g，不符合规定
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法律顾问：山东鑫士铭律师事务所 曲雯律师 于海防律师