斑点免疫金渗滤法金免疫渗滤试验与滴加待测标本及金标记物顺序有关吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-02-21 05:19 标签： 免疫渗滤法
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斑点金免疫渗滤试验原理
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斑点免疫渗滤试验的基本原理是：以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的，应用的结合物是酶标记的，称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验（dotymmunogoldfiltrationassay，DIGFA），又名滴金免疫测定法（简称滴金法）。在滴金法中不需酶对底物的反应，更加简便、快速，在临床检验中应用日渐广泛医学|教育网搜集整理。
以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示红色斑点。
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免疫学技术专题：斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）&&点击次数：468&&发布日期：&&来源：上海北诺生物科技有限公司&&仅供参考，谢绝转载，否则责任自负
斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上，改用胶体金标记物代替酶，省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将试剂及标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成，阳性结果在膜上呈红色斑点。
试剂及材料
1. 渗滤装置：为一塑料小盒（4x3x0.6cm），分为底、盖两层，盖的中央有一个直径0.5cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料，盖孔下，紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭盒盖，即为渗滤装置。在孔中的NC膜上点加1-2ml特异性抗体(一抗)或抗原，室温自然干燥，保存于放干燥剂的密封塑料袋中备用。
2. 封闭液：含0.2%BSA和0.05%吐温-20的洗涤液。
3. 洗涤液：50mol/L，pH7.2 PBS。
4. 特异性抗体(一抗)或抗原
5. 金标抗体
1. 取出渗滤器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（约100ml）封闭液；
2. 待其渗入盒内，在NC膜上，加待检标本1滴（约50ml）；
3. 待其渗入盒内，在NC膜上，滴加2滴（约100ml）洗涤液；
4. 待其渗入盒内，在NC膜上，加金标抗体1滴（约50ml），使其与NC膜上吸附的检品发生反应；
5. 待其渗入盒内，在NC膜上，滴加2滴（约100ml）洗涤液；
6. 至洗涤液完全渗入盒内
在小孔NC膜上出现红色反应时为阳性反应，阴性反应不着色。
1. 特异性抗体(一抗)或抗原、待检标本和金标抗体的用量事先都必须应用方阵法确定最适用量。
2. 盒底充填的垫料吸水性要强，否则影响结果。来源：联系电话：021-E-mail：【】
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