实时实时荧光定量pcr原理时用的ROX refence 有什么作用

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-03-05 09:36 标签： 实时荧光定量pcr原理
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实时定量PCR时用的ROX refence 有什么作用
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矫正仪器用的，有的仪器需要加rox，比如abi stepon珐憨粹窖诔忌达媳惮颅e，需要占一个通道，有的仪器就不需要加，比如roche
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实时荧光定量PCR技术的原理及应用,注意事项,适合菜鸟入门
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【求助】ROX
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这个帖子发布于4年零95天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
刚开始做定量PCR，买了invitrogen的C11744的定量试剂盒，但发现里面所要求的仪器里没有ABI7500，问了技术人员说，其实这款试剂盒也能用于ABI7500，但在最后结果分析的时候要把ROX的值减掉，这里有几个疑惑，请大虾请教：
1.ROX在反应体系中到底起的是怎样一个作用，论坛里说是为了校正孔与孔之间的荧光信号差异，论坛里的前辈能不能帮忙点拔下，到底是怎么样个原理来校正孔间差异(因为仪器有边缘效应)
2.把ROX的值减掉，ROX的值是以什么形式出现的，也是CT值吗，那用什么来减？
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您好，我想问一下您的问题怎么解决的，我也是买的 invitrogen的C11744的定量试剂盒，本来是要用ABI7900做的，但是仪器出了点问题，不得不用ABI7500来做，就出现了您所说的这些问题，想问一下您是怎么解决的。谢谢
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定量试剂基本是能通用的。
ROX的主要作用就是校正光程差，因为都是采用的CCD成像方式读取荧光信号，这样96孔板中最中间位置的光程最短，最边上位置光程最长。ROX每孔加的量都一样，荧光信号值都应该是一样的，因为存在光程差，实际仪器读出来的值是不一样的，最后样品的实际荧光值除以ROX的实际荧光值，得出Rn值，这样光程差的影响就消除了。
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ABI7500加入ROX校正时，加入量比其它的仪器要少一些，是1/10～1/5，不知道ROX加多了是否影响到实验结果？
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sdsd edited on
ＲＯＸ加得多的话，整个ＲＯＸ的荧光信号就高，系统计算出的Ｒｎ值会整体小。
只要每孔加的量一样，不会影响结果。可能扩增曲线难看点。
如果的量加ROX的话扩增曲线会比较乱，所以加少了不行。
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看了几位前辈的回复，不知是否可以这样理解，每孔加ROX，同样会因为光程差的影响导致ROX的荧光信号差异，这样将每孔的PCR产物荧光强度与ROX的荧光强度相比就能消除光程差所带来的影响？那在整个的扩增曲线中也包含有ROX的荧光信号？
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看了几位前辈的回复，不知是否可以这样理解，每孔加ROX，同样会因为光程差的影响导致ROX的荧光信号差异，这样将每孔的PCR产物荧光强度与ROX的荧光强度相比就能消除光程差所带来的影响？那在整个的扩增曲线中也包含有ROX的荧光信号？
ROX的荧光信号是在第四通道读的，SYBR Green和FAM是在第一通道读的，它们的激发光和发射光波长不同。 扩增曲线中只是用它来计算Rn值。
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blizarrd edited on
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实时定量PCR时用的ROX refence 有什么作用
比如abi stepone，需要占一个通道矫正仪器用的，有的仪器需要加rox，有的仪器就不需要加
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