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黄曲霉毒素B1（AFB1）ELISA检测试剂盒说明书
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上海索宝生物科技有限公司供应黄曲霉毒素B1（AFB1）ELISA检测试剂盒说明书（Ⅰ）&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 产品编号：HE09004-1&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 一、概要黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。而使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素B1残留。参考国家标准GB/T 3。本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间短于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素B1抗原，样本中黄曲霉毒素B1和此抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体，同时黄曲霉毒素B1抗体与酶标二抗相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素B1成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素B1的含量。三、适用范围可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、花生酱、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。四、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅水浴锅┅┅天平：感量0.01g┅┅旋转蒸发仪 / 氮气吹干装置┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml、多道 250ml ┅┅刻度移液管：10ml┅┅洗耳球┅┅漏斗┅┅分液漏斗┅┅烧杯：50ml┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml ┅┅定量分析滤纸试剂：----甲醇（分析纯）----去离子水----二氯甲烷（分析纯）----石油醚（或正己烷）（分析纯）五、提供的材料与试剂
其它各规格装量按比例增加或减少，具体装量以实物为准。
标准品&6瓶*
AFB1酶标物
AFB1抗试剂
浓缩洗涤液（10&）
AFB1浓缩样品稀释液（2&）
*注：标准品浓度为0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb, 81ppb。六、溶液的配制配液1: 样品稀释液用去离子水将AFB1浓缩样品稀释液（2&）按1 : 1体积比进行稀释，即1份AFB1浓缩样品稀释液（2&）加1份去离子水。用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。配液2: 洗涤工作液用去离子水将浓缩洗涤液（10&）按1 : 9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10&）加9份去离子水。用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。配液3: 样品提取液1用去离子水将甲醇按3 : 2体积比进行稀释（3份甲醇+2份去离子水）用于提取样本中的黄曲霉毒素。配液4: 样品提取液2&&&&&& 用去离子水将甲醇按4 : 1体积比进行稀释（4份甲醇+1份去离子水）用于提取样本中的黄曲霉毒素。配液5: 样品提取液3&&&&&&& 用去离子水将甲醇按1 : 1体积比进行稀释（1份甲醇+1份去离子水）用于提取样本中的黄曲霉毒素。配液6: 6个不同浓度的标准液取6个1.5ml离心管，从1到6进行编号。取6个浓度的标准品（10&）（0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb, 81ppb）50&l分别加入以上6个管中，然后每管加入450&l的去离子水进行1 : 9倍稀释，制备成0ppb、 0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb的标准液（见下表）。配置好的标准液请在一周内用完（4℃存放）。
工作浓度 （ppb）
标准品（10&）浓度
标准品（10&）体积
去离子水体积
七、样本前处理步骤（一）花生、花生酱；玉米、麦类等谷物；曲奇饼干、蜂蜜蛋糕处理方法┅┅取10g粉碎样品，加入20ml样品提取液1；┅┅剧烈振荡5min；┅┅用定量分析滤纸过滤；┅┅用样品稀释液按1 : 9比例稀释（1份滤液+9份样品稀释液）；┅┅取稀释后液体待测。稀释倍数：20（二）饲料处理方法方法一：┅┅取3g粉碎饲料样品，加入9 mL样品提取液2；┅┅剧烈振荡10min；┅┅3500r/min离心5min，或用定量分析滤纸过滤；┅┅上清液或滤液用去离子水按1 : 7比例稀释（1份滤液+7份去离子水）；┅┅取稀释后液体待测。稀释倍数：24方法二（推荐方法）：┅┅取1g粉碎饲料样品，加入8mL样品提取液1；┅┅剧烈振荡10min；┅┅3500r/min离心5min，或用定量分析滤纸过滤。┅┅取1.28mL上清液或滤液，加入2mL二氯甲烷，剧烈震荡5min，静置或离心分层，取出下层二氯甲烷相；┅┅向上层水相中再加入2ml二氯甲烷，按上述方法重复提取一次，合并二氯甲烷相；┅┅于50℃下氮气吹干，或水浴蒸干；┅┅加入0.2mL甲醇，振荡混匀；┅┅用去离子水按1 : 9比例稀释（1份滤液+9份去离子水）；┅┅取稀释后液体待测。稀释倍数：12.5&& （三）食用油处理方法┅┅取5g食用油样品于小烧杯中；┅┅用10mL石油醚（或是正己烷）分次将试样转移至125mL分液漏斗中；┅┅准确加入15mL 样品提取液3，加塞振荡5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液；┅┅取1mL上述提取液，用4mL蒸馏水或去离子水稀释；┅┅取稀释后液体待测。稀释倍数：15（四）酱油、醋、葡萄酒处理方法┅┅取1ml样品，加入5ml二氯甲烷，剧烈震荡5min；┅┅4000r/min 离心5min；┅┅取下层二氯甲烷2ml，于50℃下氮气吹干；┅┅加入0.4ml甲醇，震荡混匀；┅┅用去离子水按1：9比例稀释（1份滤液+9份去离子水）；┅┅取稀释后液体待测。稀释倍数：10（五）干黄酱、火锅底料处理方法┅┅取1g样品，加入8ml样品提取液1（60%甲醇），火锅底料同时加入5ml正己烷；剧烈振荡5min；┅┅4000r/min，离心5min；┅┅取上清液4ml，加入8ml二氯甲烷，剧烈振荡5min；┅┅4000r/min，离心5min，取下层二氯甲烷相4ml；┅┅于50℃下氮气吹干；┅┅加入0.25ml甲醇，振荡混匀；┅┅用去离子水按1:9比例稀释（1份滤液+9份去离子水）；┅┅取稀释后液体待测稀释倍数：10八、检测步骤测定前应须知：1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。5、黄曲霉毒素B1可致癌，应戴手套操作。操作步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。3、洗涤工作液在使用前也需回温。4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5、加标准品/样本：加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入AFB1酶标物50ml/孔，再加入AFB1抗试剂50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。7、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15～20min。8、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。（若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定）。九、结果判定结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含黄曲霉毒素B1成负相关。1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围（ppb）。假设样本1的吸光度值为0.659，样本2的吸光度值为1.525，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.101；0.1ppb为1.738；0.3ppb为1.313；0.9ppb为0.831；2.7ppb为0.469；8.1ppb为0.262。则样本1的浓度范围是0.9ppb～2.7ppb；样本2的浓度范围是0.1ppb～0.3ppb再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中黄曲霉毒素B1的浓度范围。2、定量分析（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝
B&标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0&0（ppb）标准溶液的平均吸光度值（2）标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素B1标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素B1实际量。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）十、检测方法灵敏度、准确度、精密度试剂盒灵敏度：0.1ppb检测限：花生、花生酱、谷物、糕点&&&&&&&&&&2ppb；饲料&&&&&&&&&&&&&&&&&&&2.4ppb；饲料（推荐方法）&&&&&&&&&&&&&&1.2ppb；食用油&&&&&&&&&&&&&&&&&&1.5ppb；酱油、醋、葡萄酒、干黄酱、火锅底料&&&&&&1ppb。回收率：花生、玉米等谷物：90&15%曲奇饼干：90&15%蜂蜜蛋糕：85&15%饲料：85&15%食用油：90&15%酱油：85&15%醋：90&15%葡萄酒：90&15%干黄酱：80%&10%火锅底料：95%&10%精密度：试剂盒的变异系数均小于10%十一、注意事项1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3、每加一种试剂前需将其摇匀。4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。6、储存条件&保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm&0.5）时，表示试剂可能变质。8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min（或更长）。反之，则减短反应时间。9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。10、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。十二、贮藏条件及保存期&&&& 贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。保存期：该产品有效期为12个月。&
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ELISA法检测花生酱中黄曲霉毒素B1前处理方法的改进研究
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黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒检测本：玉米皮、饲 料、食用油 试剂盒灵敏度：0.1ppb 存贮条件：2～8℃ 保质期：12月黄曲霉毒素类真菌（黄曲霉寄曲霉）毒代谢产物具强致癌性主要存于谷物、坚、棉籽及些类血液物饲料相关产品其黄曲霉毒素B1（AFB1）毒性、致癌性、污染频率均居于首位薄层色谱直检测黄曲霉毒素用制备品及析品费费力使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速准确析品黄曲霉毒素B1残留本试剂盒应用ELISA技术研发新代真菌毒素检测产品操作间短 于60min能限度减少操作误差工作强度面家食品检测试剂网站关于检测原理介绍网站看试剂盒3元物利用竞争ELISA酶标板微孔预包羊抗鼠抗体检测加入黄曲霉毒素Bl抗体孵育与包羊抗鼠抗体结合洗板加入标准品或品溶液及黄曲霉毒素Bl酶结合物竞争性与黄曲霉毒素Bl抗体结合形抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0a007a0nm波酶标仪进行检测品黄曲霉毒素Bl浓度与吸光度反比
详细技术指标：品检测限： 饲料------------------------------2.5μg/kg麸皮、玉米皮------------------5μg/kg收率----------------------------85%±10%精密度-----------试剂盒变异系数均于10%
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用试剂盒容易
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