请教lnc rna提取试剂盒和mRNA引物设计的有关问题

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-03-24 07:32 标签： rna引物设计
primer5.0引物设计所用序列为什么是mRNA?做qRT-PCR时设计引物是直接将NCBI的mRNA区域中CDS区序列拷贝到primer5.0里面,可是做qRT-PCR前不是有一步是将RNA逆转录成cDNA吗?那以mRNA设计引物不是反了吗?我觉得是应该以mRNA的互补序列设计引物才对啊?
豆浆ibBO27MQ
设计引物的时候已经用到了两条链吧,一条链设计前引物,另一条设计后引物.RT-PCR得到的是双链cDNA,所以用mRNA设计或者用互补链设计都可以啊,因为着两条链都会用到,只要把U换成T,是绝对可以P出来的.
谢谢，可是逆转录后得到的是双链cDNA？mRNA不是单链吗？而且逆转录时用的引物不是试剂盒里面自带的oligo dT和Random6吗，所以得到的不是单链吗？
逆转录分三步，第一步是以mRNA为模板形成一条单链cDNA，第二步是水解mRNA，第三步是以单链cDNA为模板形成双链cDNA。
大多数反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为赖氨酸的tRNA，在引物tRNA 3'－末端以5'→3'方向合成DNA。反转录酶中不具有3'→5'外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNase H活性；由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子，将由RNase H从RNA 5'端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的第一条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA分子
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扫描下载二维码请问引物设计是用mRNA和其内部的CDS为模板都可以吗?构建质粒时候,我想把一个基因连在质粒上,可不知道是用基因的什么序列,mRNA还是CDS,还是这个基因在染色体上的DNA,还有就是添加酶切序列,我是新手,请大侠通俗的解释一下,你应该经常做这方面的内容吧,其他人都是理论家,不是实战家呢
mRNA和CDS的序列是一致的,只不过是RNA和DNA的U和T的区别.PCR是合成DNA,当然是用CDS了.CDS是编码序列,染色体的DNA是体内转录后剪切才表达,构建质粒的DNA在体外细胞内培养剪切不了.酶切位点的选择是根据构建质粒所用的载体上的酶切位点,和CDS上的酶切位点决定的.原则是：1.选择载体上位置相差不少于6个碱基的两个酶切位点,2.两种酶要有最适缓冲液,3.两种酶不是同尾酶,即不能切相似的序列,4.两种酶最好比较常用,这样价格不贵,容易买到,5.最后也是非常重要的,要选择目的基因即CDS上没有的酶切位点,这个可以在Google搜索Web cutter 2.0这个网页,输入CDS序列,查看CDS上的酶切位点,选择可以使用的酶切位点.
大侠阿,CDS序列不时mRNA上面的一部分吗，怎么成了DNA？
CDS是编码序列codingsequence.当然是DNA啦。DNA分为编码链和反向互补的非编码链啊。
不知道你是否做过质粒构建的实验,而不是在理论，；我即将做这个实验，不知道你能否留下个qq,给一些指导
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基因克隆中有关点突变引物设计问题
来源：互联网 发表时间： 15:39:50 责任编辑：王亮字体：
为了帮助网友解决“基因克隆中有关点突变引物设计问题”相关的问题，中国学网通过互联网对“基因克隆中有关点突变引物设计问题”相关的解决方案进行了整理,用户详细问题包括:我需要用引物设计点突变一段基因的3‘端几组氨基酸密码子（每次突变一个氨基酸密码子），突变的密码子已确定，不能用密码子的兼并性，想请问一下各位高手引物设计中要注意哪些问题，具体解决方案如下：解决方案1：
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解决方案2：
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