为什么Simple western blot条带中空的条带分子量和传统western blot条带中空的有差异

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-09-02 02:46 标签： western条带分析
关注今日：38 | 主题：381600
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】western blot 结果中的蛋白条带分子量怎样具体确定？
页码直达：
western blot 结果中的蛋白条带出现在marker的两个条带之间（36KD和55KD），那条带的分子量怎样具体确定？一抗说明书上有预测的分子量和研究所得的分子量范围，无法具体确定。谢谢！
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
通过氨基酸序列可以计算理论分子量，实际的分子量要用质色联用来确定，比较精确。SDS-PAGE测定分子量比较粗略，用长槽电泳，以marker各分子的迁移率做标准曲线，比对你的目标蛋白。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
理论上的分子量已经计算过了，和实际蛋白条带所在位置还是有所差异的。谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园为什么western blot band条带的大小和预测的分子量大小不同?
这小伙n1ce274
但即使是这样,Western Blot得到的条带大小依然会和预计的分子量大小有出入.大部分常见的原因如下：1.翻译后修饰—比如蛋白的磷酸化,糖基化等,这些都会增加蛋白的分子量大小.2.翻译后剪切—比如很多蛋白首先被合成为前体形式,然后通过剪切获得生物学活性,比如pro-caspases.3.剪接变异体—相同的基因,经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白.4.相对电荷—氨基酸的组成 (带点 vs 不带电) 5.多聚体—比如蛋白二聚体.
为您推荐：
其他类似问题
扫描下载二维码什么样的条带算是好的western blot结果_百度知道关注今日：38 | 主题：381600
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【求助】请教Westernblot条带中间细（甚至空），而两头粗的原因可能有哪些？谢谢
页码直达：
这个帖子发布于5年零53天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教Westernblot条带中间细（甚至空），而两头粗的原因可能有哪些？谢谢 大致条件：电泳：200v电转：半干，15v，30min1st Ab: overnight2nd Ab: 1h,RTDevelopment: ECL, 3min
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
可能是你加的样有杂质
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
hhh625128 可能是你加的样有杂质能说具体点吗？不是很明白。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
就是比如细胞裂解液裂解后，加了buffer煮，煮完没离心活离心不干净。样加到孔里杂质一般掉中间，电泳时候中间就没了啊，我猜
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
hhh625128 就是比如细胞裂解液裂解后，加了buffer煮，煮完没离心活离心不干净。样加到孔里杂质一般掉中间，电泳时候中间就没了啊，我猜谢谢回复。但是我觉得这个原因有点牵强。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
上样量是不是比较多？降低上样量看看呢。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
luch75 上样量是不是比较多？降低上样量看看呢。10ug（about10ul） sample, 应该不多啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
蛋白不均一，上样前用涡旋仪混下试试看。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
xiongfeitcm 蛋白不均一，上样前用涡旋仪混下试试看。有vortex before loading sample啊， 这个应该也不是问题的。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
你的maker也是这样哑铃状的吧？那就是胶配的有问题，不是配方有问题，而是你制版没夹好，凝的时候没凝好
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
hhh625128 你的maker也是这样哑铃状的吧？那就是胶配的有问题，不是配方有问题，而是你制版没夹好，凝的时候没凝好Thanks so much.Development的时候marker没有显示。但是在transfer以后，marker还是很正常的。不过你说的这个可能性还是有的，只是做的时候又不漏胶，如何预先知道配胶有问题啊？我一般把gel的recipe全部加完后，再vortex几下，应该也是均匀了的，隔个半分钟让bubble减少一点，然后用1ml的tips加resolving gel，一般加个7.5ml, 再用95% ethanol封胶，这个过程有哪里不妥的地方吗？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
kanry 有vortex before loading sample啊， 这个应该也不是问题的。那就是制胶的问题了，我用的BIO-RAD制胶器玻璃板用得久了就是有点漏，但是感觉最影响胶的就是放置的时间问题，尽量凝的好一点，配胶时候的细节多注意。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
还有上样前加热煮沸的样品要放置冷下来后再上，否则会导致胶变形也会出现这种结果。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
xiongfeitcm 还有上样前加热煮沸的样品要放置冷下来后再上，否则会导致胶变形也会出现这种结果。这个倒是没有做到，下次改进一下看看情况如何。Thanks so much.
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
你找到真正原因了吗？我现在也遇到了同样的问题！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我也想知道
到底是交的问题还是loading的问题
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
后面想想，单从结果看，就是样品在band的两端多，中间少，但这也可能是假象。因为也可能是蛋白在中间的地方聚集较多，做ECL时，导致中间部分荧光淬灭，而形成这样的哑铃型。因此，可以试试减少样品上样量，或者减少一抗的incubation时间，或者用ECL plus试一下。个人观点，仅供参考。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
有可能是浓缩胶梳孔内有气泡，影响样本在后续电泳中浓缩和分离。建议分离胶和浓缩胶须完全聚合，插梳子时可稍倾斜缓慢插入，避免混入气泡。拔梳子时可边加水缓冲液边拔，以免有气泡进入梳孔使梳孔变形。拨出梳子后用缓冲液冲洗胶孔两遍以去除残胶。点样后须立刻电泳，避免样品扩散。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼主现在的问题解决了吗？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
请教Westernblot条带中间细（甚至空），而两头粗的原因可能有哪些？谢谢
电泳：200v
电转：半干，15v，30min
1st Ab: overnight
2nd Ab: 1h,RT
Development: ECL, 3min 做成竖状的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我也出现很多类似的问题，求答案~~~
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我最近也是出现这样的情况，不知道怎么解决。难道不是转膜的问题吗？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园

我要回帖

更多关于 western条带分析 的文章

 

随机推荐