如何分析SDS-PAGE电泳图扫描后图上sds page蛋白电泳法条带的量

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关于SDS-PAGE电泳图谱分析的疑问
我有一张SDS-PAGE电泳图谱,颜色深的是我的目标表达蛋白。我点样之前定过蛋白,点样的时候保证的是总蛋白一样,所以有些样的点样量只有1.3μl。可最后的结果,貌似是有些样的总蛋白浓度太少了吧。是不是从图上一眼就能看出总蛋白不一致啊?可问题是颜色浅的样正好是我点样量少的样,请问这是怎么回事?定蛋白的时间跟加完loding buffer的间隔有2小时(期间蛋白一直在冰上),蛋白会降解的那么快么?
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【求助】为何SDS-PAGE电泳条带不能完全跑开?(附电泳图)
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已经跑过很多次SDS-PAGE电泳了,之前都不错,但这两天跑的分子量低的部分(即凝胶下端)跑不开了,以前能看到第5条marker,现在第4条marker已经到最下面了,用的电泳槽和电泳时的电压完全一样,试剂也都换新配的,结果还是这样,请大家帮我分析以下吧,谢谢!
这是以前跑的,效果还行.查看完整版本请点击这里:
vvmmoy ( 18:10:50)
我今天又跑了一个,让溴芬兰跑到一半就终止了电泳,但结果和上图一样,只是条带间距离更紧密一些,这个问题大家都没有见过吗?
只好自己顶一下了.
jujuba ( 18:11:03)
小分子量的蛋白质是不容易跑好的,很容易糊掉,一下是我的建议:
1你在帖子上并没有说明你的SDS-PAGE电泳胶的浓度,建议用15%的,在不行就用18%的。这两个胶也不是很好跑,上样量不能大,建议做几个梯度。
2尝试用小肽电泳检测在第4条的稍下方的那个蛋白,电泳过程中使用60V的电压,可能要跑8小时以上。这个方法准能成功!
vvmmoy ( 18:11:21)
我用的是12%的胶,我把浓度升高实验一下,但以前我也是12%的胶啊,不明白了。
BOSS2011 ( 18:11:37)
你的溴酚兰是不是配了很久的了呀,我做的试验中溴酚兰放了很久以后,是会这样的,试试看把溴酚兰重新配一下应该就不会了。
vvmmoy ( 18:11:55)
溴酚兰的确放了很久了,这个原因很有可能,我重新配,再实验
S6044 ( 18:12:12)
注意你的凝胶时间,TEMED用量
应该是胶配的有问题,你的MARKER的条带就不对
kswl870 ( 18:12:28)
也有可能是丙烯酰胺放的过久,坏掉了
我也遇见过,重配了就好了
查看完整回复请点击这里:解决时间: 15:15
(共有<span
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最好有实例,还有mark的具体作用
提问者: [] [] []
回答者: [] [] []
一级 一星助者
首先看内参跑出的条带量是否一样 就是条带的深浅和厚度是否一致 如果一致说明蛋白上样量均一& 其次看你曝的目的蛋白 这时需要具体情况具体分析 浅且少表明该蛋白在组织或细胞中表达少 反之则多 marker是用来确定分子量区间的 当你转膜后 根据内参和目的蛋白的分子量大小根据marker说明书&按照上面条带的区间将膜裁开&然后敷一抗和二抗 希望对你有帮助
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我用的是考马斯亮蓝显色,对western做出来是什么样的不了解啊。能说说染色之后怎么看吗
作者:maggie214 时间: &共0人支持此评论
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生物秀旗下 [Website]sds-page蛋白电泳图怎么是这个样子.我制胶的时候就摇了摇而已啊?
ckascqjxle
这图肯定不行,你重新做吧~估计是没干透你摇了摇,感觉上密度呈波浪变化.sds-page经常出各种问题,有时候即便很标准完美的操作,也容易跑出来的图很难看,多跑跑吧
就是制胶的时候可能是有了气泡了,吧
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电泳图分析
我是电泳新手,这次电泳跑这样,请帮我看看
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