DNA和RNA的OD值
DNA和RNA的OD值
最近通过搜集资料，对OD值方面的信息进行了总结，粘上来与大家共享，望对大家有所帮助，在此对提供资料的各位战友表示感谢。OD值1.&&朗伯——比尔（Lambert－beer）光吸收定律：A＝－lgT＝εb cA——吸光度，又称光密度“O.D”。T——透光度， T＝I / I。， I。——为照射到吸收池上的光强，I——为透过吸收池的光强。ε——摩尔吸光系数或克分子吸光系数（L?mol－1?cm－1）。b——样品光程（cm），通常使用1.0cm 的吸收地，b=1cm。C——样品浓度（mol/L）。由上式可以看出：吸光度A与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正比。2.&&DNA和RNA的OD值2.1&&原理嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），在230nm处为吸收低谷，其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处，对于纯的核酸溶液，测定A260，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μg／mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。据朗波－比尔光吸收定律A＝-lgT＝εbc知，c＝A/εb，而b通常为1cm，所以，通常以1OD值相当于50μg／mL双螺旋DNA，或40μg／mL单螺旋DNA（或RNA），或20μg／mL寡核苷酸计算。2.2&&纯度DNA和RNA的纯度可以通过测定260nm，230nm和280nm的紫外吸收值来测定，纯的DNA OD260／280在1.8-1.9，OD260／230应大于2.0，纯的RNA OD260／280在1.9-2.0，如果DNA比值高于1.8-1.9，可能有RNA没有去除干净，如果DNA比值小于1.8-1.9，可能含有酚或者蛋白质（RNA中含有酚或者蛋白质比值也会降低），若OD260／230小于2.0说明有残存的盐或小分子杂质污染。2.3&&浓度DNA和RNA的量，据朗波－比尔光吸收定律A＝-lgT＝εbc知测量样品的浓度为c＝A/εb，又知ε＝0.020，在b＝1cm的情况下，c＝A/（0.020×1）＝50×A，则未稀释的样品的浓度为50×A×稀释倍数（μg／mL）＝50×A×稀释倍数/1000（mg／mL）2.4&&注意事项：1)&&比色杯应为石英杯，玻璃杯在此波长时读数不准。2)&&检测时应使OD260值在 0.15 到1.0之间，数值比较准确。3)&&这种比值测定的方法仅仅适用于核酸浓度大于0.25ul／ml的时候，浓度小于0.25ul／ml的时候测量误差较大。4)&&既含有RNA又含有蛋白质也可能使比值维持在1.8，这个时候要根据电泳情况鉴定是不是含有RNA，或者测定一下是不是含有蛋白质；5)&&A260/A280比值可提供DNA纯度的一个参考，但A260/A280 比值会受pH影响。如果未调pH，比值可能与实际差别很大。如果需要准确数值，建议在10 mM Tris Cl, pH 8.5中检测，此时纯净的DNA A260/A280比值应为1.8-2.0（注意应使用同样缓冲液作为对照）。&6)&&进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。7)&&可以在220-330 nm 之间进行扫描，此扫描可以检测是否有其它因素影响OD260，如在325 nm 处有吸光值说明有污染物或比色皿不干净。)8)&&DNA的量与260 nm处的吸光度值（OD值）成正比，在引物设计时，1个OD值的合成DNA的重
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历史上的今天
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blogTitle:'用260/280检测核酸纯度到底准不准确',
blogAbstract:'首先\r\nWarburg和Christian（1942）提出OD260/OD280比值是蛋白制品被核酸所污染程度的很好指标。当蛋白中掺入了核酸之后，OD260/OD280比值变化很明显，尤其是纯的蛋白制品中掺入了一点点核酸后，变化最明显。例如：纯的蛋白样品，其OD260/OD280比值为0.57，而掺入5%的核酸之后，该笔直上升到了1.06。\r\n但是反过来却是不成立的，即：这个比值不能用来指示核酸被蛋白污染的程度。因为核酸在260nm和280nm处的消光系数比蛋白质高很多，即使有明显的蛋白污染也不会大幅度改变核酸溶液的OD260：OD280比值。例如，纯的核酸的OD260：OD280比值是2.0，当掺入了5%的',
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紫外分光光度计 A260A280和A260A230的含义
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这个比值是在测量DNA,RNA提纯后的纯度的,如果有蛋白质污染,这个比值就比较小.因为蛋白质在280处有吸收值.高纯度的DNA、RNA这个比值应该在1.8-2左右.这个网页有几个图,你注意看最下方的那个,纵坐标是比值,横坐标是纯度,
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是RNA/DNA吧，RNA在260nm有吸收峰，而DNA在280nm有吸收峰
A280是指氨基酸的紫外光吸收的最大峰值在280nm波长。用来分析蛋白质的含量。A260则是核酸分子的紫外吸收最大峰值在260nm。用来对核酸、核苷酸、核苷和碱基进行定性和定量分析。
A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
这个比值是用来测量核酸纯度的。纯净的DNA和RNA在A260和A280都有吸收值，但以260最高。而核酸提取过程中最主要的污染物蛋白质在A280处有强烈的吸收值，所以计算这两个吸收峰的比值就可以确定核酸的纯度。DNA的这个值一般是1.8～2.0，而RNA则是2.0。值得注意的是，这个比值并不能很好的反应出核酸的纯度，简单来说寡聚核酸会造成A260值升高，如果核酸有降解，则会导致A260/A280值...
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