实时荧光定量pcr结果溶解曲线Tm跨度宽是怎么回事

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-05 12:05 标签： 荧光测定pcr报告阳性
荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降，形成一个峰。_百度拇指医生
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?荧光定量pcr溶解曲线为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降，形成一个峰。
拇指医生提醒您：以下问题解答仅供参考。
随着温度升高，当温度达到Tm值时候，DNA就会变性分成单链的，此时荧光染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱。
你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的曲线图，出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰。
出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生。
去看数学公式，反正我是不懂数学的
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向医生提问谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用_百度知道
谁能具体解释一下荧光定量PCR中溶解曲线的意思以及作用
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溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始PCR这之间的时间过长）所致；基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。详细请见我的回答：
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【求助】荧光定量PCR的CT值和溶解曲线问题
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这个帖子发布于4年零199天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好，本人刚开始做实验，关于qPCR还有很多东西不太清楚，请教大家两个问题1、为什么我的cDNA十倍稀释以后，跑出来的CT值相差不大？原倍、十倍、一百倍、一千倍的CT值都在21-24之间，我看别人说会相差3.3左右，可是我都只相差1左右，这有关系吗?2、扩增目的基因和管家基因后的溶解曲线，只有管家基因有单峰，目的基因的曲线呈波浪形，是不是退火温度的问题啊？退火温度试过60度和62度，目的基因的溶解曲线都没有峰。。。我扩增的条件是95℃ 2min；95℃ 15s，62℃ 1min 45个循环。。。虚心求教，谢谢啦！！
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5555，没有人回答我吗？
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zjubell 说明你扩增出来的根本不是目的基因。呵呵 只是非特异性扩增而已。你阴性对照有条带么谢谢你的回复！之前的确没有扩增出来，这几天我把退火温度做了个梯度，在66℃的时候溶解曲线的峰很高，可是溶解曲线不是窄峰，是比较宽的高峰，之后电泳也没有看见条带，这是什么问题呢？下面是我的图。
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zjubell 都是些二聚体。一般150bp以上的单一产物，melt 峰就会在80度以上。你这峰这么缓慢，一般来说就是各种杂的二聚体了。建议你做个阴性对照，如果阴性对照也是这样的融解峰，那二聚体无疑了。 那我的内参和目的基因的退火温度不一致，可以吗？
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【求助】请问荧光染料定量PCR熔解曲线Tm值过高对结果有什么影响
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这个帖子发布于6年零109天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
从熔解曲线看Tm值在93度左右，单峰，Ct值为25，用LightCycler 480 基础软件Tm calling分析不出Tm值，被认为是没有峰，只有在92度以下才会出Tm值。产物大小165bp，GC含量65%。请问这种情况对结果分析会有什么影响吗？出来的结果是否可靠？
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dazzlingpuck 编辑于
我已经通过添加DMSO把Tm值降下来了，但还是不知道高了会对结果有什么影响。技术支持就说Tm太高或太低都不好。
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我也遇到了同样的问题，不知道你现在条件优化的怎么样了？
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加了DMSO就可以
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