下载作业帮安装包
扫二维码下载作业帮
1.75亿学生的选择
哪里做实时荧光定量PCR结果准确?
圆圆wan1195
重庆威斯腾生物可以做原代细胞培养,他们有自己的实验室,实验质量比较有保证.
为您推荐：
其他类似问题
扫描下载二维码 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
实时荧光定量PCR具体实验步骤 doc
下载积分：600
内容提示：实时荧光定量PCR具体实验步骤 doc
文档格式：PDF|
浏览次数：2261|
上传日期： 01:04:59|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
实时荧光定量PCR具体实验步骤 doc
官方公共微信简介/实时荧光定量PCR
检测结果图谱实时荧光定量PCR（Real-time PCR）是指在指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。Real-time&PCR可快速、灵敏的检测和以及细菌DNA，因此是许多应用的理想工具。该方法广泛用于人类传染病的诊断和病原定量，在动物病原体基因的检测，畜禽产品的检验检疫，生物制品的鉴定等领域 。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied&Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。
工作原理/实时荧光定量PCR
原理所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的&PCR&产物量也不能计算出起始&DNA&拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段，&PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，可以选择在这个阶段进行定量分析。实时荧光定量&PCR&技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和Ct值。Ct值的定义在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念——Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的时所经历的循环数。荧光域值（threshold）的设定PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold = 10’SDcycle 6-15 Ct值与起始模板的关系研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数&Real-time&PCR&详细介绍 。荧光化学荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡，两端分别标记一个报告荧光基团和一个猝灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和猝灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为诊断和个体化用药分析的首选技术平台。SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
应用&/实时荧光定量PCR
分子生物学研究核酸定量分析&对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测，如流感、禽流感 ，&转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi基因失活率的检测等。基因表达差异分析& 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异（如药物处理、物理处理、化学处理等），特定基因在不同时相的表达差异以及或差显结果的确证。SNP检测 &检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因结构的巧妙性，一旦SNP的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的SNP检测将会变得简单而准确。 &甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症，Laird报道了一种称作Methylight的技术，在扩增之前先处理DNA，使得未甲基化的变成，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和来区分甲基化和非甲基化的DNA，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。医学研究&产前诊断 &人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。病原体检测 &采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。药物疗效考核 &对(HBV)、(HCV)&定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。肿瘤基因检测 &尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤&ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测 。
检测H7N9禽流感的主要方法/实时荧光定量PCR
检测试剂2013年春季，中国内地发生多起感人人类事件，截至4月6日下午五时，全国共报告18例人类感染，6人死亡。针对此次禽流感事件，对送检样本进行H7N9检测的方法共有两种，一种是进行核酸检测，即采用实时荧光定量PCR方法对H7N9的特异性核酸进行检测；另一种一种就是对样本进行H7N9病毒分离鉴定，直接获取毒株。“核酸检测快速准确，是现在实验室采用的主要检验方法。”专家说，H7N9特异性核酸检验耗时短，从完成样本处理到最后获取检测结果，进行确诊，整个过程在3-5个小时内完成，可实现对病毒的快速诊断。&检测过程分为三个步骤：对医院采集样本进行标本处理，如果发现可疑病例，将由当地医院专业的医护人员进行采样，主要提取患者的咽拭子样本或含漱液、、肺部清洗液的样本，安全保存后送至实验室开展病毒检测；提取病毒，随后与H7N9核酸检测试剂配成反应体系，因为检测试剂主要针对H7N9的特异性核酸片段会起反应。可以说，通过这个试剂能快速确定病人是否感染了H7N9禽流感病毒；放入荧光定量PCR仪做病毒核酸特异扩增，进行荧光定量检测，最后结果进行检测分析，判断是否呈阳性反应 。浙江省公共卫生检验检测重点学科群首席专家、应急监测关键技术重点实验室主任教授，介绍了浙江省自行合成H7N9禽流感检测试剂 ：“H7N9禽流感检测试剂被放置在食指大小的密封透明试管里。每套检测试剂由6份EP管组成，包含白色的水滴形小管‘引物’，以及棕色小管‘探针’。引物和探针主要是针对H7N9特异性核酸片段。目前这些试剂被放在专用试剂盒中，放置在专用冰箱保存。”“工作人员需要将检测的结果，结合实验时设置的阳性、阴性对照进行分析，只有阴性、阳性结果成立，且样本结果可靠时才能够最终确定是否为H7N9禽流感病毒，一般来说，检测时间需3-4个小时。”
&|&相关影像
互动百科的词条（含所附图片）系由网友上传，如果涉嫌侵权，请与客服联系，我们将按照法律之相关规定及时进行处理。未经许可，禁止商业网站等复制、抓取本站内容；合理使用者，请注明来源于。
登录后使用互动百科的服务，将会得到个性化的提示和帮助，还有机会和专业认证智愿者沟通。
此词条还可添加&
编辑次数：11次
参与编辑人数：5位
最近更新时间： 15:33:58
贡献光荣榜实时定量RT-PCR的原理及方法--《免疫学杂志》2003年S1期
实时定量RT-PCR的原理及方法
【摘要】：实时定量RT-PCR广泛应用于定量检测mRAN表达水平,为基础研究、分子药物学和生物技术研究提供了一种有力的方法。该法具有易操作、高通量、敏感性高和特异性强的特点,随着新酶、新探针和新仪器的发展而得到快速的发展。本文将对实时定量RT-PCR的定量原理、仪器应用、探针种类的研究进展以及细胞因子mRNA表达水平检测上的应用作一综述。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：Q503【正文快照】：
实时定量RT.PCR(Real.time删erse t珀nscIiptionquantitative叫yme脚把chajn reaction, Real—time RT—PCR),所谓实时定量PCR是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号的强弱来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量…。实时PCR技术较之以前的以终点法进行定
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式，仅支持PDF格式
【引证文献】
中国期刊全文数据库
叶丽虹,尤嘉琮,乔玲,蔡娜,王长晔,刘毅,吴晶辉,吴莲英,王洪辉,张晓东;[J];生物化学与生物物理进展;2005年05期
中国博士学位论文全文数据库
邱妍;[D];南京农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库
王莹;[D];山东大学;2006年
贾晓晖;[D];山东大学;2006年
祁萍;[D];兰州大学;2007年
张涛;[D];四川大学;2005年
尹秀玲;[D];吉林大学;2006年
白兴华;[D];中国农业科学院;2007年
杨春霞;[D];南京林业大学;2007年
于影;[D];东北林业大学;2006年
邱晋;[D];四川大学;2007年
晋国营;[D];山东大学;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库
张驰宇;成婧;李全双;曹威;孙金燕;;[J];江苏大学学报(医学版);2006年03期
赵以恒,王淑英,刘海宁,蔡广宇,关晓辉,尹荣;[J];东北电力学院学报;2000年01期
唐正霞,关晓辉,秦玉华,马丽霞;[J];东北电力学院学报;2001年04期
沈亚领,李爽,迟莉丽,雷肇祖;[J];工业微生物;2000年02期
张永奎,王安,钟本和,梁斌;[J];环境工程;2001年05期
刘海宁,关晓辉;[J];环境工程;2003年05期
徐镜波,郎佩珍;[J];环境化学;1994年03期
刘慧,王晓蓉,王为木,沈骅;[J];环境科学;2005年01期
王玮,屠传经,胡亚才;[J];环境污染与防治;1997年02期
魏以和,王军,钟康年;[J];国外金属矿选矿;1996年01期
中国重要会议论文全文数据库
周冬生;韩延平;宋亚军;童宗中;裴德翠;戴二黑;张玲;包静月;李敏;崔百忠;张秀清;王津;郭兆彪;祁芝珍;金丽霞;翟俊辉;杜宗敏;王效义;汪建;黄培堂;杨瑞馥;;[A];微生物生态学研究进展——第五届微生物生态学术研讨会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库
吴学玲;[D];中南大学;2007年
马红霞;[D];中国人民解放军军需大学;2002年
于录;[D];中国人民解放军军需大学;2003年
兰英;[D];东北师范大学;2004年
柳巨雄;[D];吉林大学;2005年
刘会超;[D];中国林业科学研究院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库
弋英;[D];南京农业大学;2004年
彭丹辉;[D];中国农业大学;2005年
赵咏梅;[D];陕西师范大学;2005年
房丹;[D];南京林业大学;2005年
陈金军;[D];湖南农业大学;2005年
赵鑫;[D];东北林业大学;2005年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库
叶丽虹;吴莲英;郭威;马宏涛;张晓东;;[J];中华医学杂志;2006年01期
中国博士学位论文全文数据库
秦华;[D];西南大学;2006年
谢红涛;[D];华中农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库
李艳霞;[D];东北林业大学;2006年
董京祥;[D];东北林业大学;2006年
刘甜甜;[D];东北林业大学;2006年
于影;[D];东北林业大学;2006年
汪宏斌;[D];承德医学院;2007年
陈虹;[D];新疆农业大学;2007年
白爽;[D];东北林业大学;2007年
李红艳;[D];东北林业大学;2007年
罗伟;[D];上海交通大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库
杨道生;;[J];文山学院学报;2010年01期
李大伟;林琳;王春辉;辛静;;[J];中国石油勘探;2010年04期
徐丽秋;苏永生;赵玉军;刘海防;高玉峰;王长文;贾赟;;[J];畜牧与兽医;2009年09期
岳志芹;刘荭;梁成珠;高宏伟;徐彪;邓明俊;江育林;;[J];水生生物学报;2008年01期
周富俊;;[J];甘肃科技;2008年05期
乔彩霞;张鹤晓;赖平安;高志强;汪琳;蒲静;吴丹;柏亚铎;谷强;张伟;段向英;;[J];生物工程学报;2008年05期
李钱峰;蒋美艳;于恒秀;辛世文;顾铭洪;刘巧泉;;[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2008年02期
王琪;黄崇;张照斌;胡建英;张仁陟;;[J];环境科学学报;2008年12期
王朴;王红丽;;[J];中国储运;2007年01期
白利;;[J];企业技术开发;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库
邱敏甄;王柏勝;凃美瑜;郭常勝;;[A];膳食变迁对民众健康的影响：挑战与应对——第二届两岸四地营养改善学术会议学术报告及论文摘要汇编[C];2010年
彭年才;李明;苗宝刚;张镇西;;[A];2010年第三届国际食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
刘慧;王洋;刘敏;;[A];第十二届中国青年信息与管理学者大会论文集[C];2010年
李细明;陈建宇;;[A];第27届中国气象学会年会副热带季风与气候变化分会场论文集[C];2010年
雒书华;;[A];“经纬股份杯”2010’促设备、器材、专件技术进步经验交流研讨会论文集[C];2010年
林楠;;[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
孙晓飞;张强;;[A];中国企业运筹学[2010(1)][C];2010年
周文坤;;[A];中国企业运筹学[2010(1)][C];2010年
冯涛;江南;曹亚妮;陶文;;[A];信息工程大学测绘学院第五届博士生学术论坛论文集[C];2010年
侯小波;何孟;;[A];2010中国环境科学学会学术年会论文集(第二卷)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库
陈磊;[N];科技日报;2011年
陈磊;[N];科技日报;2011年
李大庆;[N];科技日报;2011年
田雅婷;[N];光明日报;2011年
方宁;[N];政府采购信息报;2011年
王卓霖　滕昶;[N];中华建筑报;2011年
记者 吕欣;[N];遵义日报;2011年
潘青青;[N];台州日报;2011年
靳元祥;[N];中国食品报;2010年
;[N];21世纪经济报道;2010年
中国博士学位论文全文数据库
孟凡君;[D];吉林大学;2010年
杨文良;[D];中国地质大学（北京）;2010年
姜大峰;[D];山东大学;2010年
曲永义;[D];山东大学;2010年
周波;[D];中国协和医科大学;2010年
席波;[D];中国协和医科大学;2010年
杭小同;[D];中国疾病预防控制中心;2010年
李志伟;[D];北京交通大学;2010年
章博;[D];中国石油大学;2010年
史曼;[D];第四军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库
冯洁;[D];上海交通大学;2011年
薛涵;[D];山东大学;2010年
王慧娟;[D];昆明医学院;2010年
李丽燕;[D];浙江大学;2010年
李超峰;[D];浙江大学;2010年
叶晓磊;[D];中国地质大学（北京）;2010年
李美燕;[D];华北电力大学（北京）;2010年
王雪;[D];北京交通大学;2010年
李明贺;[D];吉林大学;2010年
于贵林;[D];中国医科大学;2010年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号其它相关分类 >>
按品牌选择 >>
仪器名称：实时荧光定量PCR 仪
英文名称：
国产/进口：进口
产地/品牌：瑞士/罗氏
：LightCycler96&
参考报价：
总点击数：1443
本半年点击数：45
产品类别：
&制造商：Roche, 瑞士 罗氏
Roche公司2012年最新推出一款实时荧光定量PCR仪，型号LightCycler 96。高性价比的平台，准确、高重复性的数据，符合MIQE，数据能直接用于发表文章，友好易学的界面，坚固耐用，无需维护。
- 结合前沿工艺的优雅设计，延续高均一性和高稳定性的优良传统
- 完成一次常规PCR 反应时间少于50 分钟，让您的工作更加高效
- 高灵敏度，支持高分辨率熔解曲线(HRM) 分析
专为舒适的应用体验打造
- 用最简单的方式获得 qPCR 结果
- 触摸屏，更简便的操作
- 简单易用的软件，PCR新手也可轻松上手
- MIQE标准的实验数据，更先进的硬件设计，更全面的功能与出众的性能
您科研工作的得力助手
- 支持SYBR Green染料法，水解探针法，HRM检测
- 内置经典的绝对定量，相对定量和终点法，基因分型分析方法，并支持PCR扩增效率修正
全波长，高光强，超长使用寿命
所有样本同时检测，快速精准
避免光信号的损失，业内独有
激发检测波长
470/514 (SYBR, FAM, HRM)
533/572 (VIC, Hex, Yellow555)
577/620 (Red610, ROX, )
645/697 (Cy5)
4重荧光, 带自动校正与颜色补偿
热循环系统
Peltier半导体元件, 96孔温控模块
温度均一性
&0.2&C, STD & 0.1&C
温度准确性
梯度PCR功能
梯度PCR温控范围
最大梯度温控跨度
&0.4, STD & 0.2, (区分2倍浓度差)
10 个数量级
LightCycler 480 - 96孔板（白色，透明）
LightCycler 八联管（白色）
绝对定量，相对定量，熔解曲线
终点法基因分型，HRM* (v1.1 免费升级)，阴阳判定*(v1.1 免费升级)
瑞世康科技（Research Scientific）是一家专注于科研分析仪器设备咨询、销售、技术、售后服务为一体的专业高科技公司，总部位于香港，在欧洲和中国大陆地区均设有分公司。我们依托整个营运团队在生命科学、化学分析仪器行业的专业背景以及在国际贸易领域丰富的管理经验，致力于严格、高效地筛选欧美专业制造商作为协议供货商，通过一流的库存和物流管理体系，致力于为目标地域的生命科学、食品药检、农业生态等行业的用户提供尖端、优质的仪器设备和技术服务。
瑞世康科技力争做全中国客户信赖的重要伙伴，不断开拓与创新，做以产品为导向的专业型企业。在市场开拓、销售、服务等方面，瑞世康科技的舞台已全面展开。 为迅速应对瞬息万变的市场变化，瑞世康科技不断完善营销体制， 在欧洲，以设在法国巴黎的供应商管理中心为核心，开展密切贴近地区的供货商合作洽谈。在香港、中国大陆成立了销售公司，大力促进市场开发，以充分捕捉市场的不同需求。
文化和精神
用心做事，诚信经营； 以人为本，创新为魂；坚韧内省，积极上进； 专业之道，惟精惟一。
梦想和愿景
我们致力于创造一个负责任的、有信用的、永续经营的公司，以坚实的业务结果为所有的投资人和股东创造价值和回报。我们致力于营建一个公平的、和谐的、愉悦的工作环境，以持续的业务增长为每一位员工提供稳定的工作和持续的职业发展。我们致力于建立一个集成的、高效的、多功能的支持营运平台，以整合的业务资源为每一个合作伙伴提供有互补的业务元素，以共同创造商业价值。我们致力于成为一个专业的、灵活的、周到的仪器设备服务供应商，以快捷的业务模式为每一位客户提供性能适用、质量可靠、价格合理的产品和服务
* 姓 　名：
* 地　 区：
请选择省份
* 手机/电话：
* E-mail：
请寄产品资料：
请报价格：
不需要报价
我对您的“实时荧光定量PCR 仪” 感兴趣。请联系我并提供报价。
我希望获得多家供应商报价
浏览该公司同类产品
浏览其他公司同类产品
您最近浏览过的产品
Copyright(C)
中国生物器材网 电话：021-