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产品名称：Transwell 细胞迁移实验对外服务！
英文名称：
国产/进口：国产
产地/品牌：威斯腾生物
型号：112&
参考报价：
总点击数：225
本半年点击数：103
产品类别：
实验介绍 细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备： 可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8&m，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板： 用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。 2.2制备细胞悬液 ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。 ②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5&105/ml。 2.3接种细胞 ①取细胞悬液100&l加入Transwell小室。 ② 24孔板下室一般加入600&l含20�S的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 ③培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。 2.4结果统计 直接计数法，&贴壁&细胞计数，这里所谓的&贴壁&是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去，通过给细胞染色，可在镜下计数细胞。 取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适当风干。 0.1%结晶紫染色20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。 400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。 实验周期 1个月 服务周期 1-2个月 收费标准 欢迎询价详谈 更多实验技术服务请见中心网站，或来电询洽！
【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
【全国免费热线】：400-675-6758
【电话】&023--
【邮箱】&china-
【官网网址】
【地址】&重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼
& 公司简介
& 重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司（简称&威斯腾生物&、&威斯腾诊断&、&威斯腾生物医药&）放眼于全球生物医药前沿技术转化应用开发，立足于全国生物医药研发检测合作及项目孵化、成果转化，现在发展为一家专注生物医药技术转化、分子诊断产品开发及创新生物药物开发的高科技集团公司。总部设立于重庆高新区，同时在上海和北京设有管理团队和运行机构。公司拥有七大服务平台：细胞生物学研究平台、分子生物学研究平台、病理学研究平台、免疫学研究平台、动物模型研究平台、蛋白质与多肽研究平台、测序和芯片研究平台，已为数百家国内外研发机构与药企提供专业的生物研发检测合作和科技成果转化项目指导。此外，公司拥有四大创新研发中心：CRISPR/Cas9靶向基因修饰药物开发平台、纳米靶向载药创新平台、高通量/高内涵筛选平台、分子诊断开发平台，除了进行公司的研发项目外，还可为医药企业、研发团队及研发企业提供协同研发服务。同时公司拥有发明专利50余项，致力于诊断产品开发、功能医学检测、第三方医学检测以及基因药物的研发。
&&威斯腾生物及其下属公司获得众多荣誉，如&中国医药企业发展促进会&理事会理事单位、&重庆市医药行业协会&副会长单位、北京市海淀区生物与大健康协会副会长单位、重庆市生物医药检测平台运营单位、重庆市科技型企业、重庆市知识产权试点单位、国家级高新技术企业等。
& 核心竞争力
荧光量子点材料开发和运用
快速荧光原位杂交（FISH）
CRISPR/Cas9基因定点编辑技术
基因芯片诊断
ChIP表观遗传研究
医学模式动物开发
产业布局：
ctDNA,CTC液体活检
病理医学诊断
PDX肿瘤筛查
POCT产品开发
IVD产品开发
分子医学诊断
创新研发系统
& 行业交流
& 2015年12月&由中国医药企业发展促进会、中国医药科技成果转化中心主办，重庆市医药&产业发展办公室指导，威斯腾生物医药承办的&首届2015&中国（重庆）生物医药前沿技术与产业化发展研讨会&在重庆渝州宾馆隆重举行；&
& 2016年4月 &新加坡工程院院士、美国电子工程院连勇院士到威斯腾生物医药交流访问；
& 2016年6月 &美中药协（SAPA）总会前会长、美国强生公司研发总监、美国药学家协会院士戴卫国博士到威斯腾生物医药交流访问；
& 2016年6月 &威斯腾生物医药受邀参加第二届药学进展前沿高峰论坛；
& 2016年8月 &威斯腾生物医药受邀参加2016北京生物医药科技成果展示暨项目推介会；
& 2016年10月 &威斯腾生物医药受邀参加&科技部科技成果直通车暨首届科技成果路演活动&；&
& 2016年10月 &威斯腾生物医药受邀参加2016中国（泰州）抗体药物高峰论坛；
& 2016年11月 &威斯腾生物医药受邀参加中国医药企业发展促进会第三次会员代表大会；
& 2016年11月 &威斯腾生物医药成为诺奖医学峰会投资委员会常务委员单位；
& 2016年12月 &威斯腾生物医药受邀参加北京市海淀区生物与健康产业协会第一届会员大会暨2016中关村核心区生物与健康产业发展高峰论坛；
& 2017年1月 &&威斯腾生物医药受邀参加首届国际未来论坛；
& 2017年1月 &&威斯腾生物医药受邀参加第二届中国天使两会双创年度盛典；
& 2017年3月 &北京生物技术和新医药产业促进中心潘悦主任一行到威斯腾生物医药交流访&问；
& 2017年4月 &&威斯腾生物医药受邀参加四川省人民政府主办的医药健康产业深度合作和创新发展座谈会。
& 企业文化
& 公开透明的竞争文化机制
& 竞争文化的培养是企业文化着重培养的重要内容，良好的竞争氛围使每位员工不甘落后和停滞。采取正确的竞争策略，能够极大地调动企业员工的积极性、创造性，焕发出竞争精神和创新精神，使人的潜能得到全面、充分地发挥，从而使整个企业的竞争能力得到全面地提高。
& 公开透明的竞争机制的建立，使每位员工看到并享有畅通的晋升通道，保证每位员工在威斯腾都能一展所长。
& 重视素质培养和全面发展
&&威斯腾非常注重企业文化的建设，提倡&以人为本&的人才理念，关注员工的持续成长，倡导正能量，形成&勤奋，忠诚，热情，向上&的企业文化。
&&素质是人的品质、能力、素养的总称，企业员工的职业素质是影响企业管理与发展的重要因素。高素质的人才，不在于经验的长久，而在于长久的经验培育出来的能力。提升员工素质是揭示各个方面及竞争力的利器。员工个人不仅可以参加企业组织的各种培训，还主动积极的进行自我学习与提高，不断的修炼自我，提高自身的职业素质，从而达到与时俱进，增强竞争力。
& 和谐&家&文化
&&公司提倡和谐&家&文化，致力于为员工提供良好的办公环境、营造轻松舒适的办公氛围，公司在对员工关怀上下足了工夫，让每一位企业员工真正感受企业文化的力量。&威斯腾管理委员会委员如是表示。一个好的公司，不能仅仅只注重品牌的打造，更要重视人才、重视技术、重视企业文化建设。这就是一个富有朝气，活力的威斯腾生物！
欢迎致电威斯腾售后服务中心。联系电话：免费热线-办公室电话-023-
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中国生物器材网 电话：021-细胞侵袭实验方法 技术前沿 北纳生物
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来源：北纳创联
1.&CCK-8检测细胞增殖曲线
以 MDA-435-OL-Sec23a-GFP为实验组, MDA-435-OL-LV3NC-GFP为阴性对照组, 均有空白对照。实验在96孔板中进行, 每种细胞每天设置5个复孔, 每孔细胞数量初始设置为2 000个, 每个孔内加入的细胞悬液为100 μL。进行吸光度测定时, 每孔先加入CCK-8试剂10 μL, 在37 °C箱内孵育 2 h后, 使用酶标仪测定450 nm处吸光度(D)值, 连续测定5 d。按照D真实=D测CD空白计算出每天相应的真实D值(取5个复孔的平均值), 然后利用连续5 d测得的真实D值绘制增殖曲线。在增殖曲线对数生长期内任意取两点, 根据公式计算出细胞倍增时间 (doubling time, DT), 公式为DT=t×[lg2/(lgNtClgNo)], 其中, t为增殖曲线两点间的时间间隔, No为对数生长期内第一个时间点的D值, Nt为对数生长期内第二个时间点的D值。
2.&Transwell小室迁移实验
MDA-435-OL-Sec23a-GFP细胞为实验组 , MDA-435-OL-LV3NC-GFP为阴性对照组, 两组均取对数生长期细胞用不含血清的DMEM制成单悬液, 使用血细胞计数板计数后备用。将 Transwell小室轻轻放入24孔板孔内, 每个Transwell 小室上室均加入300 μL细胞悬液, 内含5×104 细胞; 下室加入800 μL含10% FBS的DMEM培养液。实验组和对照组分别设置3个Transwell小室, 设置完成后将24孔板放入37 °C细胞培养箱。24 h后取出24孔板,轻轻移出Transwell小室并吸出上室液。使用润湿的棉签轻轻擦蘸小室底膜上表面, 然后使用PBS轻轻润洗小室上室。Transwell小室经冰甲醇固定30 min, PBS轻轻润洗2遍后使用结晶紫染色5 min, 再使用PBS轻轻润洗2遍。然后待小室底膜干燥后使用刀片轻轻裁下小室底膜, 将底膜底面向上置于载玻片上, 使用中性封片, 干燥后于FSX-100智能导航仪20倍物镜下拍摄图像, 拍摄时随机选取20个视野。统计每张图片中细胞数量进行数据分析。
2.&Transwell小室侵袭实验
实验前, 取C20 °C保存的Matrigel胶在4 °C条件下融化, 与预冷的DMEM培养液按照1׃11的比例均匀混合, 操作在冰上进行, 使用的移液管头、EP管等均需提前预冷。取60 μL稀释后的Matrigel胶均匀铺在Transwell小室底膜上, 置于超净台内自然干燥后备用。Transwell小室细胞侵袭实验的其余实验设置均同方法2中所述。
3.&克隆斑形成实验
取MDA-435-OL-Sec23a-GFP和MDA-435-OLLV3NC-GFP对数生长期的制成单细胞悬液, 使用血细胞计数板计数后备用。使用梯度稀释法适当稀释细胞悬液后, 向6孔板的每个孔内分别加入含50 个细胞的2 mL细胞悬液, 细胞悬液使用含10% FBS 的DMEM培养液配制。每种细胞均设置3个6孔板复孔。12 h后镜下可观察到6孔板内细胞已经全部贴壁, 此时将皿中培养液换成琼脂浓度为0.2%的含10% FBS的DMEM, 置于37 °C培养箱内培养。10 d后镜下可观察到6孔板内出现集落生长的细胞克隆斑。此时弃去含的, 用PBS 轻轻润洗2次, 然后6孔板内每孔加入2 mL冰甲醇固定30 min, 固定结束后使用PBS轻轻润洗2次, 然后使用结晶紫染色5 min, 再用PBS轻轻润洗后室温干燥。干燥完成后将6孔板移至显微镜下观察计数每个孔内细胞克隆斑数量, 超过50个细胞的克隆斑即可计数。根据细胞克隆斑形成率=(克隆数/接种细胞数)×100%来计算细胞体外克隆率。&
用SPSS 22.0统计软件进行分析, 所有数据以 mean±S.D.来表示, 采用t检验的分析方法, P&0.05为差异有显著统计学意义, P&0.001为差异有极显著统计学意义。
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