RT-PCR与荧光定量pcr步骤 PCR有什么区别

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-03-23 03:57 标签： 荧光定量pcr
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请教PCR高手，使用SYBR Green I法进行荧光定量PCR对于产物大小有什么要求？
本人打算做荧光定量PCR，现在做了普通的rt-pcr，三种基因的大小为352bp，362bp，228bp，结果都扩增出来了，下一步打算做荧光定量RT-PCR，荧光染料为SYBR，请问是不是可以接着使用普通Rt-PCR中所使用的引物呢，还是重新设计引物，使其产物大小在50-150bp之间？？？求解答？？
哦 谢谢哈！
恩，非常感谢！我觉得您说的挺对的，只是引物要跨外显子设计，自己设计了一下但是没有找到合适的，要么特异性低，要么Tm值相差超过2度，还是仔细再找找吧
引物只要跨外显子设计就行了，其余的和普通的引物设计一样&&设计的软件是Prime 5.0和 oligo 6.0& &目的产物大小在100-200bp
设计的时候 是在外显子的连接处进行设计&&这样子就避免了内含子的引入
如何才能跨外显子啊？怎么看外显子呢？
请问如何跨外显子啊？本人新手！跨外显子设计是什么目的呢？
外显子的连接处是怎么看的啊？？？？？？、、、
到NCBI里面找到你的目的基因的编码区CDS，编码区里面是外显子集合的，然后你再在基因的全序列中找到外显子，这些外显子就按顺序拼合成CDS区~~~，拼接处，就是连接处
市面上的RT-qPCR试剂盒大多退火温度都在42度，能到50度及以上的极少，因为酶不支持。60度以上到65度实际是最好的，可以消除RNA的二级结构。SYBR Green I是非饱和染料，片段长度太长，荧光信号会出现偏差，不死扩不出来，而是荧光信号出现偏差后的错误信息。
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