应用RT-PCR法快速检测马铃薯卷叶病毒--《河北农业大学学报》2000年04期
应用RT-PCR法快速检测马铃薯卷叶病毒
【摘要】：根据马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列 ,设计合成了一对寡核苷酸引物 ,从感染PLRV的马铃薯病叶组织中提取出病毒的RNA ,进行cDNA合成及PCR扩增 ,得到一条长度约 6 2 0bp的特异PCR扩增产物 ,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致。建立了快速灵敏简便的PLRV检测的新方法 ,其灵敏度要比PLRV的血清学检测方法高 10 4倍 ,在基因水平上为PLRV的检测提供了更新手段 ,并在农业部植物检疫实验所马铃薯病毒检测中心推广应用
【作者单位】：
【分类号】：S435.32
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400-819-9993马铃薯卷叶病_中国百科网
马铃薯卷叶病
    
马铃薯卷叶病毒是最重要的马铃薯病毒性病害，在所有种植马铃薯的国家发生非常普遍。易感品种的产量损失可高达90％。 症状：初期症状是流行季节由蚜虫传播感染造成的。上部叶片卷曲，尤其是小叶的基部。这些叶片趋向于直立拜且一般是淡黄色。对许多品种...
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Copyright by ；All rights reserved.马铃薯卷叶病毒(PLRV)酶联免疫分析（ELISA）围观14次我要分享我要投稿试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用& &&&&&目的：本试剂盒用于检测植物组织，细胞上清及相关液体样本中马铃薯卷叶病毒(PLRV)水平。实验原理：& 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中马铃薯卷叶病毒(PLRV)。用纯化的马铃薯卷叶病毒(PLRV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中马铃薯卷叶病毒(PLRV)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的马铃薯卷叶病毒(PLRV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中马铃薯卷叶病毒(PLRV)的存在与否。&试剂盒组成：
试剂盒组成
酶标包被板
样品稀释液
浓缩洗涤液
（20ml&20倍）&1瓶
（20ml&30倍）&1瓶
&样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。&操作步骤：1.&&&&&&&& 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.&&&&&&&& 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50&l。然后在待测样品孔先加样品稀释液40&l，然后再加待测样品10&l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.&&&&&&&& 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。&&4.&&&&&&&& 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用5.&&&&&&&& 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.&&&&&&&& 加酶：每孔加入酶标试剂50&l，空白孔除外。7.&&&&&&&& 温育：操作同3。8.&&&&&&&& 洗涤：操作同5。9.&&&&&&&& 显色：每孔先加入显色剂A 50&l，再加入显色剂B 50&l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟10.&&&& 终止：每孔加终止液50&l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.&&&& 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。&结果判定：&&试验有效性：阳性对照孔平均值&1.00; 阴性对照平均值&0.10& 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15& 阴性判定：样品OD值& 临界值（CUT OFF）者为马铃薯卷叶病毒(PLRV)阴性& 阳性判定：样品OD值& 临界值（CUT OFF）者为马铃薯卷叶病毒(PLRV)阳性注意事项1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4．& 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。&保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月相关下载：点击进入展台查看更多来源：
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&&&&&&&&&&&&的马铃薯卷叶病毒
Potato leaf roll Virus
抗体稀释 的翻译结果 --cnki翻译助手
以辣根过氧化物酶标记马铃薯卷叶病毒抗体,采用双抗体夹心ELISA方法鉴定了马铃薯和洋酸浆的茎、叶、根及马铃薯块茎中的马铃薯卷叶病毒(Potato Leafroll Virus,PLRV),结果表明,对提纯的PLRV可测出的最低浓度为25ng/ml,当包被抗体浓度为40μg/ml、酶标记
基于1个网页-
【摘要】： 正2003年初在广东省阳东县调查中,观察到田间约70%的植株呈典型的马铃薯卷叶病毒(potatoleafroll virus,PLRV)病症状,为此我们对其病原进行了分子鉴定,并建立了一步法反转录聚合酶链式反应(one-step RT-...
基于1个网页-
PotatoLeafrolVirus
根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列，设计合成一对特异性引物。
Based on the reported genomic RNA sequence of PLRV, two specific primers were synthesized.
本文研究了马铃薯对卷叶和花叶病毒抗性的遗传及与产量性状的关系。
The heredity of resistance to potato leaf roll and mosaic viruses and its relation to yield characters in potato was studied.
根据马铃薯X 病毒、马铃薯Y 病毒和马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列，分别设计合成了三对寡核苷酸引物。
In the experiment, three pairs of DNA primers were designed and synthesized based on the nucleotide sequence of the coat protein (CP) gene of PVX, PVY, and PLRV respectively.
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