干旱胁迫下大豆miR396基因家族表达分析及功能鉴定--《吉林农业大学》2016年博士论文
干旱胁迫下大豆miR396基因家族表达分析及功能鉴定
【摘要】：大豆是世界上植物蛋白质和油脂的主要来源。在我国,大豆生产的增长速度远不能满足国人消费需求的增长速度,供需的巨大缺口需要依靠进口国际市场的转基因大豆来满足。大豆需水量高,对干旱胁迫十分的敏感,据统计由干旱造成的大豆减产大于其他不利因素的总和。分子育种技术已被公认为是解决传统育种技术难以解决的问题的有效手段,挖掘具有自主知识产权的可以利用的抗旱基因,培育大豆抗旱新品系,对发展我国大豆产业具有重大意义。植物microRNAs(miRNA)是一类小分子RNA,在调控植物生长发育和抵抗环境胁迫响应等方面发挥着重要的调控作用。miR396是植物中公认的保守miRNA家族之一,目前研究表明,miR396可通过调控生长调节因子(GRF)基因家族控制细胞增殖,并且与植物抵抗干旱胁迫响应相关,但大豆中miR396功能及调控作用尚不明确。本研究首先对干旱胁迫条件下大豆根和叶片形态及大豆miR396家族前体序列(Pre-mi R396)与GmGRF家族基因的表达变化进行了分析;并通过5’-RACE和原生质体瞬时转化两种方法验证了Gma-miR396与GmGRF家族基因的相互作用关系;进一步通过在拟南芥中分别超表达大豆Pre-miR396对家族各成员基因的功能进行了鉴定;并重点分析了转基因拟南芥生物量及抗旱能力的变化。结果显示,Gma-miR396介导的GmGRF网络调控在调节大豆生长发育及适应干旱胁迫响应的过程中发挥着重要作用。具体研究结果如下:1、在干旱胁迫处理条件下,大豆叶片相对未处理组变小,大豆miR396家族前体序列(Pre-miR396)的表达均表现为上调;大豆根相对未处理组变得长而发达,Pre-miR396的表达均表现为下调。2、靶基因预测结果显示,大豆miR396家族基因主要调控的是GmGRF家族基因,其中26个GmGRF基因家族成员中,有24个GmGRF成员被预测为是7个Gma-miR396(Gma-miR396a,Gma-miR396b,Gma-miR396c,Gma-miR396e,Gma-miR396h,Gma-miR396i,Gma-miR396k)成熟序列的靶基因,作用位点位于WRC区保守的“CGUUCAAGAAAGCCUGUGGAA”序列,对应保守的“RSRKPVE”氨基酸位点。对干旱胁迫处理条件下大豆叶片和根中的GmGRF家族基因进行表达分析,发现GmGRF家族基因的表达大多与大豆Pre-mi R396表达变化趋势相反。3、5’-RACE法检测到Gma-miR396在GmGRF基因上的剪切位点在“CGUUCAAGAA”与“AGCCUGUGGAA”之间;此外,利用原生质体瞬时转化法,证明了上述7个Gma-miR396和24个GmGRF呈现多对多的网络互作关系,与预测结果一致。4、在拟南芥中分别超表达大豆miR396家族11个Pre-miR396(a~k)基因,结果发现,7个Pre-miR396家族基因的转基因拟南芥(mi R396a-OE,miR396b-OE,miR396c-OE,miR396e-OE,miR396h-OE,miR396i-OE,miR396k-OE)表现出了植株矮小,叶片变小,根系变短,荚果变小,荚粒减少及生物量降低等表型特征,部分转基因株系出现了荚果和花朵畸形表型。显微分析发现,它们的叶片细胞增殖受到了抑制。此外,Gma-miR396d、Gma-miR396f、Gma-miR396g和Gma-miR396j不具有miR396基因家族的典型功能,转基因拟南芥没有表型出现。5、分析上述7个Pre-miR396转基因拟南芥的抗旱能力,发现转基因拟南芥叶片表现为适应干旱的能力增强,但种子和根适应干旱的能力下降,表现出了抗旱能力的组织差异性。在土壤干旱条件下,miR396a-OE,miR396b-OE,miR396c-OE转基因拟南芥表现为抗旱能力降低。
【学位授予单位】：吉林农业大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2016【分类号】：S565.1
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400-819-9993基于儿童心理行为模式下的小学校园交往空间设计研究--《太原理工大学》2017年硕士论文
基于儿童心理行为模式下的小学校园交往空间设计研究
【摘要】：随着社会的发展,各国竞争的逐渐激烈,各行各业对人才的需求更加急迫和明显,教育事业的改革随之产生。近年来,我国科教兴国和人才强国战略不断深化,也来越多的人们意识到了教育的重要性。国家更是强调教育要从娃娃抓起,因此基础教育更是备受关注。同时,素质教育的全面开展使得传统的教育模式土崩瓦解,新的教学模式不仅对教育工作者提出了新的要求,同时也对传统的“工厂式‘教育建筑也提出了新的要求。而且,以人为本的教育理念不断的深入人心,人们越来越关注学龄儿童的身心健康,而不是一味地关注学习成绩。相应的小学校园建筑也开始逐渐将目光转向教育建筑的人性化,小学校园建筑不再是知识教育的工具和场所,还是小学儿童的身心健康发展的场所。因此,小学校园的改革势在必行。小学是人们开始正式接受教育的第一个地方。小学校园不仅是儿童学习科学文化知识的地方,同时也是小学适龄儿童初识社会,学习与他人交往,树立良好的人生观、世界观和价值观的地方,是他们在儿童时期身心共同成长的重要场所。这也就意味着小学校园不仅要具有传统的教育功能,还应具有为学生提供交往空间的功能。小学阶段的儿童又因为他们所处的特殊人生阶段,在心理和生理上都表现出了该年龄段特有的特征,因此,对于教育建筑的交往空间的需求又有别于其他年龄段的人们。但是,纵观国内的现状,传统老旧小学仍是小学校园的主流,教育建筑的交往空间仍旧得不到应有的重视,所以小学校园交往空间的改造势在必行。当前我国城市建设高度发展。城市建设相对来说比较缓慢,城市建设的用地紧张,城市空间密度较大。但是,城市小学为了适应现代教育的需要和学生身心健康发展的需要就要做出一定的改变。基于这种情况,城市小学对于建筑设计师提出了严峻的考验,特别是位于黄金地段的小学。研究既满足城市小学各项规范指标要求的同时,还要满足日益增长的学生交往的需求,利用原有的条件创造出符合学生心理行为特点的、能充分调动学生积极性的交往空间将成为新时代下的城市小学校园设计的难点。因此,城市小学校园交往空间的设计成为教育建筑设计面临的新问题。本文通过对国内外小学校园交往空间的发展历程和发展趋势的了解和研究,结合儿童的心理特点和行为特征,分析和研究了适合儿童身心健康成长的小学校园交往空间。并对太原地区的两所小学进行实地调研,从中发现现存传统小学的缺陷和不足,提出适应传统城市小学的改造措施。最后,总结出适用于小学校园交往空间的设计评价标准。希望通过这一系列的分析研究,对今后的城市小学校园交往空间的设计和改造提供有利的理论支持。
【学位授予单位】：太原理工大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2017【分类号】：TU984.14
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400-819-9993Hsa-miR-888-5p在肝细胞癌中的表达及对增殖、侵袭和转移的影响及机制的初步研究--《吉林大学》2017年博士论文
Hsa-miR-888-5p在肝细胞癌中的表达及对增殖、侵袭和转移的影响及机制的初步研究
【摘要】：肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是临床上常见的恶性肿瘤之一,肝细胞癌发病率和病死率均较高。多年来的研究证实虽然影像学检测水平的不断提高增加了肝细胞癌的发现率,但是对肝细胞癌仍缺乏有效的早期诊断及预后判断指标。尽管手术和肝移植是首选的治疗策略,但其适应症范围有限,且根据不同的肿瘤分级标准其术后5年复发率仍大于70%。肝细胞癌对化疗、放疗、免疫治疗效果不佳,目前临床上应用的化疗药物与靶向治疗药物虽能有效杀伤肝癌细胞,但均存在副作用较大与长期应用后肿瘤耐药的问题。因此,目前在临床和科研中应更深层次的探索肝癌的发病机制,做到早诊断、早治疗并能够及时控制肿瘤进展。因此目前亟待解决的医学难题之一就是寻找HCC的早期诊断指标和药物治疗的新靶点。MicroRNA(miRNA)广泛存在于真核细胞生物及病毒中,近年来其作为调控基因所发挥的重要生物学作用被逐步确认。MiRNA研究不断取得的重大进展也为了解和研究疾病的分子发病机制和设计新的治疗策略提供了全新的视角,目前miRNA己经成为分子生物学和医学研究的重要热点领域。Hsa-miR-888-5p最近已在乳腺癌和前列腺癌的研究中有所报导,但是hsa-miR-888-5p在肝细胞癌中的具体生物学行为经文献检索并没有相关的研究报道。本论文研究的主要目的是阐明hsa-miR-888-5p在HCC中的作用并初步探讨其生物学作用机制。本论文首先检测了hsa-miR-888-5p在HCC细胞株、组织中表达水平。其次,利用miRNA拟似物转染SMMC-7721细胞株,进行体外实验,检测hsa-miR-888-5p在HCC的发生和进展等生物学行为中的作用;继而阐明hsa-miR-888-5p在HCC的增殖、分化、侵袭和迁移中的作用机制。并进一步检测MMP 9,MMP 2及p53在高表达hsa-miR-888-5p的细胞中的表达改变,从基因水平探讨hsa-miR-888-5p在HCC中可能的作用机制。一、肝癌细胞中hsa-miR-888-5p的表达研究:利用qRT-PCR的方法检测hsa-miR-888-5p在正常肝细胞株HHL-05、L02及肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、BEL7402、Hu-7中的表达;并检测了HCC患者癌组织及癌旁健康组织中hsa-miR-888-5p的表达差异。实验结果证实肝癌细胞株相对正常肝细胞株的hsa-miR-888-5p表达均明显上调。Hsa-miR-888-5p在肝细胞癌手术切除相关标本中的表达与肿瘤的组织学分化程度和肿瘤分期及术后三年的生存率有关(P0.05)。分析实验数据我们得出以下结论:hsa-miR-888-5p在HCC细胞株、临床切除肝癌组织中均表达上调。二、Hsa-miR-888-5p对肝癌细胞株生物学性状的影响:利用hsa-miR-888-5p mimics转染SMMC-7721细胞之后,获得过表达hsa-miR-888-5p的肝癌细胞株。应用MTT检测hsa-miR-888-5p对SMMC-7721细胞增殖的影响;应用平板克隆形成方法检测hsa-miR-888-5p对SMMC-7721细胞克隆形成能力的影响;应用transwell方法检测hsa-miR-888-5p对SMMC-7721细胞迁移及侵袭的影响。MTT实验及克隆形成实验均证实hsa-miR-888-5p有促进SMMC-7721增殖的趋势,经分析有统计学差异。Transwell迁移/侵袭实验结果证实hsa-miR-888-5p可以在体外提高SMMC-7721细胞株的迁移及侵袭能力。依据第二部分实验结果得出以下结论:hsa-miR-888-5p具有在体外提高SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭的生物学特性。三、高表达hsa-miR-888-5p对MMP 9、MMP 2和p53基因表达的影响:基于上述实验,设计或购买MMP 9,MMP 2及p53的相关引物,应用q RT-PCR检测hsa-miR-888-5p对于SMMC-7721肝癌细胞株MMP 9,MMP 2及p53基因表达的影响。应用明胶酶谱法检测MMP9,MMP 2在SMMC-7721肝癌细胞外液中的表达变化。然后分别提取蛋白,进行Western blot反应检验MMP 9,MMP 2及p53蛋白产物改变。经q RT-PCR检验结果显示SMMC-7721细胞转染hsa-miR-888-5p后,MMP 9,MMP-2的基因表达明显升高,而p53表达则明显降低。而作为内参对照的β-actin或GAPDH的数值在两组当中都非常稳定。明胶酶谱法检测MMP 9,MMP 2在细胞外液中的表达结果显示:在mimics组MMP 9,MMP 2的表达较对照组明显升高且差别显著。通过分析Western blot的实验结果证实hsa-miR-888-5p的表达水平对于MMP 9,MMP 2及p53的蛋白表达水平具有调控作用。高表达hsa-miR-888-5p组与对照组间比较,上述蛋白中MMP 9,MMP 2的表达量显著升高,而p53的蛋白表达水平则正好相反,其差异具有统计学意义(P0.01)。经由上述研究,本文首次初步阐明hsa-miR-888-5p在HCC中表达上调,并与肝癌组织学分化程度和肿瘤分期及术后三年的生存率有关。其表达水平的改变在促进HCC的形成和发展中起着重要的作用;hsa-miR-888-5p可能通过调节MMP 9,MMP 2和p53基因的表达改变了HCC的生物学行为。通过高表达hsa-miR-888-5p在HCC肿瘤细胞中所发挥的作用也进一步揭示了其应用于临床诊疗的可行性。然而hsa-miR-888-5p的临床实用性与应用范围的扩展则有赖后续的进一步研究。
【学位授予单位】：吉林大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2017【分类号】：R735.7
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400-819-9993城乡一体化背景下的社会保障制度整合与优化研究--《中国社会科学院研究生院》2017年博士论文
城乡一体化背景下的社会保障制度整合与优化研究
【摘要】：改革开放以来,伴随着工业化进程加速,我国城镇化经历了一个起点低、速度快的发展过程。2015年,以常住人口衡量的城镇化率已经达到了56.1%,但户籍人口的城镇化率相对较低。很多研究表明我国目前56.1%的城镇化率并没有反映真实的城镇化程度,这主要是因为大量进城农民工虽然已经全职非农,长期在城市工作、生活,但是缺乏市民身份认同,不能与城市居民享受同等的就业、社会保障、医疗卫生等公共服务,没有实现“市民化”。由于人的城镇化与城镇化进程不同步,带来了包括“城市病”、“农村病”等在内的一系列弊端,成为制约我国城镇化持续、健康、有序发展的最突出矛盾。从国际上城镇化的经验来看,我国城镇化的任务仍未完成,当前及今后一个时期,城镇化率仍将保持一个较高的增长水平,农村劳动力还将进一步向城市集聚。因此,应当顺应城镇化发展趋势要求,加快调整相关政策制度,加快推进农民工市民化。农民工市民化的最大难点是社会保障问题,直接决定了他们能否在城镇留的下来,扎的住根。一方面,相当一部分农民工群体在非正规部门就业,工作不稳定、收入波动大,不易为城镇社会保障制度所覆盖。另一方面,我国社会保障制度自身城乡分治、条块分割的特点,与城乡一体化背景下农民工在城乡之间、不同地区之间频繁流动的现状不相适应。此外,随着农村剩余劳动力不断向城镇地区、非农产业转移,农村地区家庭“空巢化”问题突出,也需要调整现有社会保障制度加以应对。作为经济社会发展的“稳定器”、“安全阀”,社会保障制度是统筹城乡经济社会发展的一个重要突破口。因此,适应国家新型城镇化发展战略的要求,研究社会保障制度的整合与优化问题,以及社会保障成本等财税问题,对于实现社会保障制度与城镇化进程的良性互动,促进社会保障事业的城乡统筹发展具有十分重要的意义。本文围绕城乡一体化的发展目标,通过对现行社会保障制度的全面剖析,提出以就业保障政策、基本养老保险、基本医疗保险和社会救助等为重点,加快整合与优化社会保障制度的政策建议。同时,对于农民工市民化这新型城镇化核心任务的社会保障成本进行了测算,并提出了配套的政策措施。
【学位授予单位】：中国社会科学院研究生院【学位级别】：博士【学位授予年份】：2017【分类号】：D632.1
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