western blot 没条带目的条带有两条 位置很接近 如图 ，请问怎么考虑及改进

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-12-21 08:01 标签： western blot条带
如何裁切western blot条带图大小长宽一致_百度知道
如何裁切western blot条带图大小长宽一致
我有更好的答案
Western Blot得到的条带大小依然会和预计的分子量大小有出入.大部分常见的原因如下,这些都会增加蛋白的分子量大小.2.翻译后剪切—比如很多蛋白首先被合成为前体形式.多聚体—比如蛋白二聚体.翻译后修饰—比如蛋白的磷酸化,糖基化等,比如pro-caspases.3.剪接变异体—相同的基因,经过选择性剪接会产生不同分子量大小的蛋白：1.相对电荷—氨基酸的组成 (带点 vs 不带电) 5但即使是这样,然后通过剪切获得生物学活性.4
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western blot条带分析
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&Western blot目的条带显影后怎么会这样？？？看图片
Western blot目的条带显影后怎么会这样？？？看图片
目的条带显出来不应该是一条吗？我的为什么会是这样？一抗 1:1000，二抗1：1万
内参的结果也不太正常，为什么条带是中空的？？
求高手指点！！谢谢！！
目的条带.jpg
一抗没有特异性？
内参估计是因为转膜的时候有汽泡
感觉是你没有封闭好，两张片子。一般封闭如果不要抽滤装备至少一个小时。此外，如果使用AP底物，建议不适用PBS改用Tris的buffer。置于条带中间空的是因为你的上样量太多，哪里集中了大量抗原经过WB的级联反应最终使得哪里的螯合于二抗的显色的酶比较多，在短时间内消耗了所有的底物，因此哪里没有荧光造成中间空白。
希望对你有用。
此外，一抗浓度也同样较高，一般在就行！
引用回帖:: Originally posted by
一抗没有特异性？
内参估计是因为转膜的时候有汽泡 这个是新买的目的蛋白的抗体，第一次做WB没有带，这是第二次做，结果。。。
引用回帖:: Originally posted by stevenshi021 at
感觉是你没有封闭好，两张片子。一般封闭如果不要抽滤装备至少一个小时。此外，如果使用AP底物，建议不适用PBS改用Tris的buffer。置于条带中间空的是因为你的上样量太多，哪里集中了大量抗原经过WB的级联反应最终使 ... 我用的封闭液是5%的BSA+20ml TBST，封闭两小时,以前做其他蛋白用脱脂奶粉封闭，BSA和脱脂奶粉哪个好一些呢，
第一张图，可以采用多压几张片子，找最好的那张分析。第二章中空是显影的问题，不是转膜的问题。
是不是加完底物特别亮，过段时间就暗了？原因如3楼，二抗结合的量太大了，底物消耗过快，压片时表达量大的反而出现空心或条带浅。一般降低二抗浓度或增强封闭。一般奶粉的蛋白种类多些相当于多种蛋白混合封闭，BSA的蛋白比较单一且较贵。我一般倾向用奶粉（便宜呀）。
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