紧急求助，为什么强阳离子交换层析洗脱顺序要在反向层析前进行

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-02-21 08:47 标签： 离子交换层析原理
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有谁做过离子交换层析啊？能给我一份实验步骤吗？多谢啦。
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你要强阳 强阴 弱阴 弱阳？
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呵呵 先介绍下你要做什么材料样品 要用什么交换剂吧····
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mzhzqx 发表于
你要强阳 强阴 弱阴 弱阳？
要纯化一个蛋白，Ni柱层析的效果不好，所以想用离子交换层析，但是以前实验室没人做过，所以想要份资料参考下。
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离子交换层析的大致原理坛上都有，但是要解决实际问题，需要掌握了原理和要领后才能开始试验，不是一挥而就的事情
该用户从未签到
可以到GE网站上下载说明书
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网上一般找得到
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离子交换色谱柱使用说明
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离子交换层析求助
作者 Biochemical
酯酶的分离纯化，酯酶来源于摩式摩根菌，采用的是传统的纯化策略。目前遇到了一个比较棘手的问题就是过柱子的时候挂不上去，阴离子DEAE,HIGH Q，缓冲液是TIS-HCI pH=8.5，结果都是活力大部分都在穿透峰。阳离子的是CM，缓冲液醋酸和醋酸钠pH=5.4，结果也是一样，活力也大部分在穿透。疏水柱：丁基 用了2M硫酸铵，也没有结合。
非专业人士给点建议
1、可否考虑改变上样缓冲液的PH
2、可否考虑把穿透处理下 再去过一次柱子 这个时候或许竞争结合的杂质少了 目的蛋白的结合活性就强了
3、上样的样品可否处理下 比如盐析 除去大部分的其他杂蛋白等，
不知道你要分离的目的蛋白等电点是多少？在不知道等电点的情况下，建议你先用强阴或强阳离子交换剂探索纯化条件，先改变洗脱液的pH，洗脱液的浓度应尽量小
用离子交换，一个非常重要的因素就是你一定要知道目标蛋白的等电点，要不你摸索条件很困难的。
这个一般是不知道等电点才发生的情况。。。。如果真是等电点不知道，建议你按照三楼说的试试摸索一下。
你的发酵液是怎么处理的？是否有高离子强度？
我看到你说大部分透过，意思应该有部分结合
我以为有两种情况：过载或离子强度太大，建议上离子交换柱前先透析。
建议用硫铵分级沉淀后透析在上阴离子，不知道在过柱子时是否电导发生很大变化？柱子是自装还是预装，最好再生一下用。可能柱效不行了。阴离子缓冲液可以50mM TIS-HCI pH=7.2上个强阴离子柱先试一下，再过凝胶柱。
祝你好运。
学习 也在用柱
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