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【求助】cDNA为模板普通PCR扩增问题
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这个帖子发布于4年零54天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
之前从血液中提取了RNA，检测后质量还可以，接着做了反转，然后用设计的引物以cDNA为模板进行了普通PCR扩增，却无任何条带，请问这是什么原因，我分析了引物没什么问题的。
不知道邀请谁？试试他们
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如果确定模板没问题（看看内参是否P出），引物没问题，还是没有条带，那就是酶有问题。
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要是内参和阳性能做得出来，那就有可能是目的RNA在血液中含量非常低。某些基因是在特定条件下表达的，说不定取血清这个基因就没有什么表达。
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请问后来做出来了吗？
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关于丁香园Roche&定量PCR相关试剂耗材，罗氏反转录试剂，Real-time&PCR试剂
& &Roche 定量PCR相关产品目录
一、核酸分离纯化
1、节省时间---更短时间处理更多样本
2、高得率---核酸损失及降解更小化
3、操作简单---步骤简化、标准化、模板纯度高
4、适用中小规模抽提、采用硅胶吸附技术
5、适用性灵活性强---产品可用于从包括组织、细胞、血浆、细菌和酵母样品内的多种原始样本中分离质粒、基因组DNA或PCR产物
产品描述及应用介绍
Viral RNA isolation Kit& 高纯度病毒RNA分离试剂盒
(100 purifications)
Isolation Kit& 从细胞、血液等样本中提取总RNA
reactions)
Tissue Kit& 从组织样本中提取总RNA
isolations)
miRNA Isolation Kit 从细胞、组织、植物样本中提取miRNA
isolations)
Template Preparation Kit 从各类样品中提取基因组DNA
(100 purifications)
FFPET DNA Isolation Kit 从FFPET切片中提取总DNA
to 50 isolations)
FFPET RNA Isolation Kit 从FFPET切片中提取总RNA
to 50 isolations)
ISOLATION REAGENT& &RNA抽提试剂( Trizol)
Plasmid Isolation Kit&&
从菌液中提取质粒，适用于克隆等实验
(250 purifications)
Plasmid Isolation Kit&&
从菌液中提取质粒，适用于克隆等实验
purifications)
Plasmid Maxi
从菌液中提取质粒，适用于转染等实验
(for up to 10 preparations)
Plasmid Midi
&从菌液中提取质粒，适用于转染等实验
(for up to 20 preparations)
Product Purification Kit&&
产品纯化及胶回收共用试剂盒
(250 purifications)
Product Purification Kit&&
产品纯化及胶回收共用试剂盒
purifications)
Gel DNA Extraction
胶回收试剂盒
(max. 100 reactions)
recombinant, RNase-free&
二、反转录试剂
1、高温反转---反应温度可达55-65度，克服RNA二级结构，获得14Kb全长的cDNA
2、根据模板特性选择引物---试剂盒中提供了随机引物和锚定的oligo(dT)
产品描述及应用介绍
Transcriptor Universal cDNA
Master&& 通用型反转录试剂盒
&l reactions
Transcriptor HiFi cDNA Synth. 高保真的反转录试剂盒
(100 reactions)
Transcriptor HiFi cDNA Synth. 高保真的反转录试剂盒
(200 reactions)
Transcriptor cDNA Synth. Kit
常用两步法反转录试剂盒
(200 reactions)
Transcriptor cDNA Synth. Kit
常用两步法反转录试剂盒
(100 reactions)
Transcriptor One-Step RT-PCR
一步法RT-PCR试剂盒
rx of 50 &l
Transcriptor One-Step RT-PCR
一步法RT-PCR试剂盒
rx of 50 &l
Transcriptor Reverse Transcrip&&
&&反转录酶
(200 reactions)
Universal cDNA Master& 新品两办法反转录试剂盒
Universal cDNA Master& 新品两办法反转录试剂盒
EvoScript Universal
cDNA Master& 新品两办法反转录试剂盒
RNA SYBR& Green I Master& 染料法一步法RT-PCR试剂盒
EvoScript RNA SYBR&
Green I Master (ROX)& 染料法一步法RT-PCR试剂盒
RNA Probes Master& 探针法一步法RT-PCR试剂盒
EvoScript RNA Probes
Master (ROX) &&探针法一步法RT-PCR试剂盒
LightCycler& EvoScript RNA SYBR Green I Master 染料法&
一步法RT-PCR试剂盒
LightCycler& EvoScript RNA SYBR Green I
Master&& 染料法一步法RT-PCR试剂盒
LightCycler& EvoScript RNA Probes
Master&& 探针法一步法RT-PCR试剂盒
LightCycler& EvoScript RNA Probes Master&
探针法一步法RT-PCR试剂盒
三、Real-time PCR
1、高灵敏度和特异性---改良的热启动PCR酶，激活后持续地运行高效qPCR反应
2、防交叉污染功能---qPCR反应前应用Uracil-DNA
Glycosylase(UNG)去除PCR产物的交叉污染，防止假阳性结果出现
产品描述及应用介绍
适用于Roche480平台
LightCycler 480 SYBR Green I Master, 10 x 5 ml&
&Roche480仪器专用，染料法
10&500反应(20 μl)
LightCycler 480 Probes Master, 10 x 5
&Roche480仪器专用，探针法
10&500反应(20 μl)
LightCycler 480 SYBR Green I Master, 5 x 1
ml&& &Roche480仪器专用，染料法
5&100反应(20 μl)
LightCycler 480 Probes Master, 5 x 1
Roche480仪器专用，探针法
5&100反应(20 μl)
LightCycler 480 High Resolution Melting
Master&& &&高分辨率溶解曲线试剂盒
5&100反应(20 μl)
LightCycler 480 Probes Master, 1x 50
ml&& &Roche480仪器专用，探针法
1&5000反应(20 μl)
LightCycler 480 RNA Master Hydrolysis probes 核糖核酸水解探针试剂盒
5&100反应(20 μl)
LightCycler 480 ResoLight Dye, 1
1&1000反应(20 μl)
需要Rox染料的平台（ABI系列仪器）
Universal Probe
探针法定量试剂
(2000次/50ul体系)
Universal Probe
探针法定量试剂
ml (500次/50ul体系)
Universal SYBR Green Master&&
染料法定量试剂
(2000次/50ul体系)
Universal SYBR Green Master&&
染料法定量试剂
ml (200次/50ul体系)
不需要Rox染料的平台（BioRad系列仪器、Roche96系列仪器）
Essential DNA Probes Master,10x5
探针法定量试剂
Essential Probes
Master&&&&
探针法定量试剂
5&100反应(20 μl)
Essential DNA Green Master,10x5
染料法定量试剂
Essential DNA Green
Master&&&&
染料法定量试剂
5&100反应(20 μl)
四、定量PCR 专用实验耗材
产品描述及应用介绍
LightCycler 8-Tube Strips
(white)&& 白色八连管
根8联管 (白色，带盖)
LightCycler 8-Tube Strips (Clear, for LC
Nano)&& 透明八连管
根8联管 (透明，带盖)
LightCycler 480 Multiwell Plate 384,
clear&& 透明384孔板
5 x 10 块板
(含封板膜)
LightCycler 480 Multiwell Plate 96,
clear&& 透明96孔板
5 x 10 块板
(含封板膜)
LightCycler 480 Sealing
LightCycler 480 Multiwell Plate
白色384孔板
5 x 10 块板
(含封板膜)
LightCycler 480 Multiwell Plate
白色96孔板
块板 (含封板膜)
五、定量PCR 仪器
Instrument &
accessories
including&&&&&&&&
主机标准配置包括：
LightCycler& 96 全自动荧光定量PCR系统
LightCycler& 96
Instrument&&&
LightCycler& 96 Block Cycler Silver
LightCycler& 96 USB
含软件与电子版操作手册
LightCycler& 96 Quick
快速操作指南
Ventilation dust
filters&&&&
Sealing foil
applicator&&&
封板膜压膜器
Instrument &
accessories
including&&&&&&&&
主机标准配置包括：
LightCycler 480 II实时荧光定量PCR系统
LightCycler& 480
Instrument&&&
LightCycler&
480& Block Cycler Silver
&96孔模块或者384孔模块
LightCycler& 480& USB
含软件与电子版操作手册
LightCycler&
480&&& Quick
快速操作指南
Ventilation dust
filters&&&&
Sealing foil
applicator&&&
封板膜压膜器
LightCycler
480 II Block Kit,
480仪器专用384孔模块
LightCycler
480 II Block Kit,
480仪器专用96孔模块
本公司优势产品：ThermoFisher（labserv、Fisherbrand）耗材、Roche、凯元电泳、eppendorf超低温冰箱及产品、licor二抗、pall等实验室试剂、耗材仪器
&订购热线：
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DNA,RNA,cDNA在实验中作为模板的要求是什么?不仅是PCR，其他生物实验它们三个作为模板的要求还有什么？我是初学者~还有比如酶切之类~
作业帮用户
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浓度要求很低的,有一点就行,纯度好些!RNA要求较高,不要降解,-80度保存,不要多次冻融循环
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做PCR？没有RNA做模板的，DNA cDNA没啥特别要求，纯度不差就行了 拿RNA做模板的不就是反转录了么， 简单来说都是纯度要求啦
DNA中不要有RNA的残留，当然其它的也是，纯度要较高。不过这也要看你做什么用。不同实验要求的纯度也不一样。
扫描下载二维码以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图．据图分析.下列说法正确的是( ) A.催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶.都能耐高温B.催化①过程的酶是RNA聚合酶C.④过程发生的变化是引物与单链DNA结合D.如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%.则一个双链DNA中.A与U之和也占该DNA碱基含量的40% 题目和参考答案——精英家教网——
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以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图．据图分析，下列说法正确的是（　　）
A、催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温B、催化①过程的酶是RNA聚合酶C、④过程发生的变化是引物与单链DNA结合D、如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%
考点：基因工程的原理及技术
分析：分析题图：图示为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图，其中①是由RNA形成单链DNA的过程，为逆转录过程；②是以单链DNA合成双链DNA的过程，是DNA分子复制过程；③④⑤是多聚酶链式反应扩增DNA片段，其中③是变性、④是复性、⑤是延伸阶段．
解：A、图中②⑤过程为DNA复制，这两个过程都需要DNA聚合酶的催化，其中⑤过程进行的温度是70～75℃，因此催化该过程的DNA聚合酶能酶耐高温，但催化②过程的酶不耐高温，A错误；B、①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶的催化，B错误；C、④为复性过程，发生的变化是引物与互补DNA链结合，C正确；D、根据碱基互补原则A-T，U-A，如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与T之和也占该DNA碱基含量的40%，而DNA分子中不含碱基U，D错误．故选：C．
点评：本题结合图解，考查基因工程、中心法则及其发展、DNA分子结构的主要特点、DNA分子复制等知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节；识记DNA分子复制的条件和DNA分子结构的主要特点，掌握碱基互补配对原则的应用，能正确分析题图，再结合图中信息准确答题．
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