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&&&免疫速率散射浊度法测定尿微量白蛋白的实验研究
免疫速率散射浊度法测定尿微量白蛋白的实验研究
Study on Immunonephelometric Method for Measuring Microalbuminuria in Urine
目的对特种蛋白分析仪测定尿微量白蛋白进行实验研究.方法通过ARRAY360全自动免疫速率散射浊度测定系统对尿微量白蛋白测定并进行方法学评价.结果本测定方法性能良好.线性范围为2～40mg/L,最大分析范围可达到8 640mg/L,平均回收率为99.9%,低值批内变异系数(CV)为1.8%,批间CV为2.8%;高值批内CV为2.6%,批间CV为4.8%.结论结合胆红素、血红蛋白、脂类、肌酐干扰小.与放射免疫法(RIA)比较有良好的相关性(r=0.999),试剂稳定.抗原过量自动检查及样本超出范围时自动稀释重复检测,加上微电脑的控制,使该实验方法可靠,测定更快速,操作更简便.
摘要： 目的对特种蛋白分析仪测定尿微量白蛋白进行实验研究.方法通过ARRAY360全自动免疫速率散射浊度测定系统对尿微量白蛋白测定并进行方法学评价.结果本测定方法性能良好.线性范围为2～40mg/L,最大分析范围可达到8 640mg/L,平均回收率为99.9%,低值批内变异系数(CV)为1.8%,批间CV为2.8%;高值批内CV为2.6%,批间CV为4.8%.结论结...&&
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问题：  &#xe6
[单选] 下列关于散射比浊分析描述，错误的是()
A . A．散射光的强度与复合物的含量成反比B . B．测定的散射信号值应是在散射信号响应值曲线的上升臂部分C . C．散射比浊法分析与透射比浊分析的原理完全不同D . D．一定要保持抗体过量以维持抗原抗体复合物的相对不溶解性E . E．抗体量恒定时，形成免疫复合物的反应速率与散射信号响应值的上升呈正比
定时散射免疫比浊分析与速率散射免疫比浊分析的最大区别是() A．所检测的蛋白质类型不同。
B．所选用的检测抗体不同。
C．光学原理不同。
D．抗原过量检测的设计不同。
E．抗体过量的量不同。
为保证定时散射比浊分析所获取的信号峰值为被检抗原产生，设计时采用() A．抗原过量检测。
B．抗体过量检测。
C．平行管检测。
D．本底的检测。
E．阈值限定。
定时散射比浊分析中，如果待测标本的预反应时间段的光散射信号超过预设阈值时，则应() A．进行全量样本检测。
B．将待测标本稀释后重新测定。
C．照常进行反应。
D．测量结果更可靠。
E．增加抗体的浓度后重新检测。
散射比浊法测定时，为维持抗原-抗体复合物相对不溶解性应() A．保持抗原过量。
B．保持抗体过量。
C．保持抗原-抗体相等。
D．保持抗原略大于抗体量。
E．与抗原或抗体量无关。
在散射比浊的设计中，多采用的原理是() A．Mile原理。
B．Rayleigh原理。
C．Fahey原理。
D．Mancini原理。
E．Sternberg原理。
下列关于散射比浊分析描述，错误的是()
参考答案：A
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免疫浊度分析技术.ppt 26页
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免疫浊度分析技术
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免疫浊度分析技术 20世纪70年代建立。它是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，在二者比例合适、并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。这种浊度可用肉眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的量。 免疫浊度测定是定量测定微量抗原物质一种高灵敏度、快速的自动化免疫分析技术,其应用广泛。
免疫浊度分析方法类型 一、透射免疫比浊法 二、速率抑制免疫比浊法 三、散射免疫比浊法 四、免疫胶乳浊度测定法
一、透射免疫浊度测定法 原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液过量时，形成的复合物随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物质的含量。 技术要点： 1）抗原参考品及待测标本作适当稀释；2）将待测标本和标准抗原液（5个浓度）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处检测各管吸光度；（3）以剂量-反应曲线求得标本中抗原的浓度。
方法评价： 本法操作简便，结果准确，能用全自动化或半自动化仪器进行分析。 灵敏度低于散射比浊法，但比单扩散法高5-10倍。 抗体用量较大，检测需抗原抗体反应达到平衡，耗时较长。 不宜用于药物半抗原的检测。 二、散射免疫比浊法
1967年Ritchie等利用激光照射在液相中的抗原抗体复合物微粒上时，部分光线发生散射的原理，通过测量散射光的强度来得知待测抗原的量，这种比浊测定法称为散射比浊法 1977年Sternberg进一步发展建立了速率散射比浊法使微量抗原的定量测定得以快速灵敏地进行。 基本原理 散射比浊法是指沿水平轴照射的一定波长的光，通过溶液时光线被免疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。反应溶液中的悬浮分子，无论是固体或胶体粒子都可以是散射中心。当入射光通过时，如果颗粒直径比入射光的波长小很多（入射光波长的1/10～1/20），则散射光在各个方向上的分布比较均匀，称为Rayleigh散射；粒径与入射光的比例增大，正向散射光强度趋于增强，当粒径略小于入射光波长时，称为Debye散射；如果颗粒直径接近或大于入射光波长时，则散射光呈明显的不均匀分布，称为Mile散射。
①入射光波长越小，散射光越强； ②散射光强度与粒子的浓度和体积成正比； ③散射光强度随焦点至检测器距离的平方和而下降。
因此，在散射比浊中，增加抗原抗体复合物的体积，减少入射光的波长，将检测点尽可能地接近散射源并选择合适的检测夹角，都可使检测的灵敏度增加。由于散射比浊法测定的是散射光的信号，避免了透射光中所含有的透射、散射甚至折射等杂信号成分的影响，因此，散射比浊法的灵敏性和特异性均好于透射比浊法。 散射比浊法类型 终点散射比浊法
速率散射比浊法
（一）终点散射比浊法 抗原、抗体相遇后免疫沉淀反应立即开始，但反应达到平衡通常需10～30min。免疫浊度测定应在复合物聚合产生絮状沉淀之前进行，否则光散射值降低，影响测定结果。因此，终点散射比浊通常是在免疫反应进行到一定时间时测量其浊度，故亦可称为定时散射比浊
（二）速率散射比浊法 速率散射比浊法是一种先进的动力学测定法，1977年由Sternberg首先用于免疫学测定。 所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。 抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时间的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s时出现一个反应最快的速率峰。峰值与抗原量呈正相关。 抗原抗体反应的速率变化 三、速率抑制免疫比浊法 本法是一种竞争性结合或竞争性抑制试验，主要用于测定半抗原和药物等小分子物质。 试剂中的特异性抗体是由半抗原与载体蛋白偶联后，免疫动物制备而成。
试验时先将一定量的已知半抗原-载体（大分子）与限量的特异性抗体发生反应，生成的免疫复合物可形成一定的速率散射峰值。 当反应系统内加入待检标本时，其中所含的半抗原（小分子）与抗体竞争结合，使大分子的半抗原-载体-抗体复合物的形成受到抑制，速率散射峰值降低，其降低程度与标本中的待测半抗原（或药物）成正比，根据标准曲线可计算出标本中待测物质的含量。 四、免疫胶乳浊度测定法 [原理]：
将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，当遇到相应的抗原时，则使乳胶颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内不阻碍光线透过，两个或两个以上胶乳颗粒凝聚时，则使透过光减少，这种减少的程度与胶乳凝集的程度呈正比，当然也与待测抗原量呈正比。 五、免疫浊度分析的影响因素
抗原抗体反应的比例
抗体试剂的质量
抗原抗体反应的溶液
增浊剂的作用
（一）抗原抗体反应的比
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速率散射比浊分析的抗原过量检测
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　　为了使您更好的了解临床的相关内容，医学教育网特搜集相关资料供大家参考。 　　速率散射比浊分析的抗原过量检测 　　真正的抗原过量检测是为保证速率散射比浊分析检测的准确性和精确度，在Beckman公司的生产的ARRY360系统中，设计有抗原过量检测系统。其原理是根据抗原抗体反应形成的浊度不断增加而设计的。在抗体固定的情况下，免疫复合物的生成量随抗原的增加而增加，当抗原量超过抗体量时，免疫复合物的量反而减少。根据这一原理，当标本中的抗原和反应液中的抗体结合后，若反应液中有未结合的抗体存在，再加入抗原时，可见新的速率峰值信号。如果没有游离的抗体存在，即抗原过剩的情况下，就不会有或者只有很小的新的速率信号出现，仪器会重新对标本进行更高稀释（1：6、1：36、1：216及1：1296等），然后进行测定，使结果准确可靠。
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临床医学检验(临床免疫学)高级职称试题及答案创新
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临床医学检验（临床免疫学）高级职称试题及答案所含题型：单选题、多选题、案例分析题一、单选题1.CH50试验中，一个CH50U是指(
)A.引起50%溶血所需要的最小补体量B.引起100%溶血所需要的最小补体量C.引起50%溶血所需补体的最高稀释倍数D.引起100%溶血所需补体的最高稀释倍数E.以上均不对答案：A2.下列关于补体活化的MBL途径的描述，错误的是(
)A.激活起始于急性期蛋白产生前B.MASP具有与活化的C1q同样的生物学活性C.C3转化酶是C4b2bD.参与非特异性免疫，在感染的早期发挥作用E.C反应蛋白可激活C1q答案：A3.B细胞膜表面主要Ig是(
)A.IgG和IgAB.IgA和IgMC.IgD和IgMD.IgD和IgEE.IgG和IgM答案：C4.下列哪项为非抗原特异性循环免疫复合物的抗球蛋白检测技术(
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)A.急性炎症B.SLE活动期C.RAD.严重肝病E.亚急性细菌性心内膜炎答案：A10.Raji细胞是(
)A.由淋巴瘤患者分离建立的K细胞株B.由淋巴瘤患者分离建立的B细胞株C.由宫颈癌患者分离建立的B细胞株D.由淋巴瘤患者分离建立的NK细胞株E.由淋巴瘤患者分离建立的T细胞株答案：B11.能抑制C1r和C1s酶活性的物质是(
)A.C8bpB.DAFC.C1INHD.S蛋白E.C4bp答案：C12.IgA、IgD和IgE不能与C1q结合的原因是(
)A.分子结构简单B.Fc段无补体结合点C.Fab段结构与补体相差甚远D.VH无补体结合点E.VL无补体结合点答案：B13.Ig分子的基本结构是(
)A.由两条相同的重链和两条相同的轻链组成的四肽链结构B.由两条重链和两条轻链组成的四肽链结构C.由一条重链和一条轻链组成的二肽链结构D.由一条重链和两条轻链组成的三肽链结构E.由一条重链和三条轻链组成的四肽链结构答案：A14.mRF与下列物质的亲和力的程度应是(
)A.对IC、聚合IgG很低，对变性IgG很高，B.对IC、变性IgG及聚合IgG均很高C.对IC及变性IgG很低，对聚合IgG很高D.对IC很高，对变性IgG及聚合IgG很低E.对IC、变性IgG及聚合IgG很低答案：B15.下列哪种补体成分在激活效应的放大作用中起重要作用(
)A.C1B.C2C.C3D.C4E.C5答案：C16.具有免疫粘附作用的补体的生物活性片段是(
)A.C1～C9B.C2aC.C3a、C5a、C4aD.C3、C4、CR1E.C3b答案：E17.PEG法检测非抗原特异性循环免疫复合物，下列不正确的描述是(
)A.4%PEG能沉淀较大分子ICB.试验受温度变化的影响大C.脂血对测定有影响D.是目前最普及简便的方法E.特异性、重复性差答案：A18.不能刺激机体组织产生自身抗体的抗原是(
)A.经化学修饰的组织抗原B.与正常组织成分有交叉反应的外来抗原C.隔绝的体内自身成分D.自身细胞HLA-DR抗原的表达E.高分化的组织抗原答案：E19.补体最主要的活性是(
)A.溶细胞作用B.调理作用C.吞噬作用D.免疫调节作用E.清除免疫复合物答案：A20.机体缺乏IgM易患(
)A.反复呼吸道感染B.化脓性感染C.革兰阴性细菌败血症D.巨球蛋白血症E.重链病答案：C21.无铰链区的Ig是(
)A.IgG、IgAB.IgA、IgMC.IgM、IgED.IgD、IgGE.IgM、IgD答案：C22.补结合试验之前的抗原抗体方阵滴定的目的是(
)A.选择抗原抗体最适比例B.使抗原抗体复合物形成最少C.使抗原抗体复合物结合补体的量最多D.避免抗原抗体复合物太多E.选择前带现象答案：A23.正常血清中，补体含量最高的成分是(
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)A.是天然血型抗体B.是胚胎晚期合成的主要抗体C.分为4个亚类D.是未成熟B细胞的抗原识别受体E.C区有4个功能区答案：C25.分离血清CIC的PEG相对分子量是(
)A.2C.E.1000答案：C26.
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