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液相色谱柱保护柱的使用注意事项
在高效液相分析检测样品的过程中，色谱柱会受到来自于样品及色谱系统的污染，从而导致色谱柱耐用性差、寿命缩短。据贤集网小编了解保护柱是液相色谱分析中重要的色谱耗材，使用保护柱可大大降低分析柱受污染的程度，延长分析柱使用寿命。下面介绍液相色谱柱保护柱的使用注意事项。来自于色谱系统的污染主要指，HPLC仪器系统中部件磨损而产生的固体颗粒，以及流动相系统过滤不完全残留的固体颗粒。来自于样品的污染主要指，未完全溶解的样品或者已完全溶解的样品进入色谱系统中，由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异，导致沉淀析出污染系统。特别是对于中药、天然产物、合成中间体及生物药品的检测，因基质的复杂性，色谱柱受污染的情况会更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等，从而带来检测成本高，测试结果不准确等各种影响。保护柱位于进样器与分析柱之间，作用主要两方面：截留不溶性颗粒、吸附样品基质中的杂质。以下几种情况建议使用保护柱：1.中药、天然产物及合成中间体等基质较复杂的样品分析——因溶解性差异导致样品析出而污染分析柱的情况比较严重，梯度洗脱时影响更大。2.生物样品分析——因样品的不可逆吸附导致的污染，保护柱可先于分析柱承受这种污染，从而延长分析柱寿命。保护柱很重要，但选择合适的保护柱更重要，选择或使用不当也可能带来截然相反的效果。保护柱使用注意事项：1.独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。2.卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时最好自行标注，并按照标注方向来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。3.直接填装的短柱型保护柱，出现柱压升高或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。4.卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。5.保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。6.如同一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。保护柱与柱前过滤器的区别和使用：使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命，当分析柱造价昂贵时，保护柱的价值尤其能体现，某些情况下，当使用的分析柱本身价格便宜，保护柱并非必选，推荐使用柱前过滤器更合适。柱前过滤器与保护柱两者外形相似，差异主要在于：保护柱内芯装有填料，而柱前过滤器内芯是可更换的滤片（一般为带孔的不锈钢烧结板）因此，从结构可以推测使用上的差异：柱前过滤器——通用性强，任何分析柱前都可使用，因其滤芯只起到过滤和截留杂质的作用，滤片污染后可超声清洗，反复使用。保护柱——柱中填料除了起截留杂质的作用外，也可除去样品中易吸附的杂质，这一点对生物样品分析尤其重要。以上就是关于液相色谱柱保护柱的使用注意事项介绍，了解更多，关注贤集网化学分析资讯频道：http://www.xianjichina.com/news/list_62
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如何保护色谱柱延长使用寿命
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一、流动相的PH应在使用的范围内 Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短.由于流动相的PH 控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难是色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的PH值.二、去除样品和流动相中的固体颗粒 样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降.因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45μm滤膜.三、使用保护柱或在线过滤器 样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降.保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞.由于柱压升高在分析故障中占很大 比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器.如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的,科选择一下方式进行补救：1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min.2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用.四、正确使用缓冲盐 缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低.缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要.正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤,使用后要冲洗.具体方法如下：1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜.2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min.含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出.注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相不含缓冲盐.3、缓冲盐析出的补救方法：1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min 2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜.五、防止强保留物质在色谱柱上存留 强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰型变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高.由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多药品特别是复杂样品而言,很难判断其是否是含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱.清洗方法：1、未使用缓冲盐：每天分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min.2、使用过缓冲盐：分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min 3、补救方法：水——乙氰——氯仿（或异丙醇）——乙氰——水 每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min.
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怎么冲洗才能有效的保护柱子，或者脏了以后怎么挽救？
qiuwei301418
qiuwei301418
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预柱和保护柱是不一样的。保护柱位置在柱前进样阀后主要是做样是过滤一下样品的污染物。预柱的位置是在泵后，主要做样是饱和流动相和过滤流动相的做样，现在很少使用预柱。保护柱的损坏有几个方面一、造成样品峰型变坏，这基本是冲洗不好的。二、造成柱效下降，一般造成下降30%，保护柱就可以报废了。至于色谱柱的冲洗，根据不同的柱子型号、样品性质等方面去具体的冲洗，情况比较复杂。使用前多看看说明书，可以和色谱柱供应商的技术人员沟通，怎么使用。冲洗的时候注意是压力，最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间，大家都有个误区就是冲洗时间用分钟或小时计算是不准确，准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。以上只是大概的过程，具体还有很多的细节，需要一点点的去注意
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c18色谱柱如何测柱效
09-07-28 &匿名提问
1.色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；2.柱头有污染；3样品超载；4样品溶剂不合适；5.柱外效应；6化学或二次保留（硅羟基）效应；7缓冲容量不足或不合适；8重金属污染。 3.如何解决峰形拖尾的问题 A．与化学有关的拖尾问题1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；3．降低进样量至&1ug。 B．与色谱柱有关的拖尾问题1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。2．使用保护柱 C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽1．进样体积过大，（通常≤25uL）；2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应&20cm，内径为0.007″）；3．检测器流通池的体积过大。
4．如何储存色谱柱 1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。 如何选择保护柱
   怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的保护柱，那么就应选择2cm或3cm长的保护柱。保护柱越长，自然所装填的色谱填料就越多，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。    保护柱的填料装填方式也很重要。目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供有限的保护作用；不过也因为所装填的色谱料较少，保护柱的长度也较短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。 另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析拄，设计方式上有直连式、手紧式或整体式。整体式设计是由色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候有色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。手上紧即可。另外从保护柱结构又分为是否可以更换保护柱柱芯。可以降低保护柱的使用成本。 大多数人是根据色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。 对于选择保护柱的原则是：在满足分析分离要求的前提条件下，尽可能的选择
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