蝴蝶兰组培种苗生产技术--《西北园艺(综合)》2017年04期
蝴蝶兰组培种苗生产技术
【摘要】：正蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属多年生附生草本植物,花形如蝶,姿态优雅,色彩鲜艳,花期长久,在热带兰中素有"兰花皇后"之美誉,观赏价值极高,深受人们的喜爱,国内外市场的需求量越来越大。蝴蝶兰属单型茎的兰花,很少有侧芽萌发,靠自然无性繁殖,繁殖率极低,速度慢,不能满足日益增长的市场需求;有性繁殖需经人工授粉才能获得种子,又因种子细小,发育不全,不含为种子萌发提供营养的胚乳和其他组织,而且种子萌发还需要共生菌滋养,所以在自然
【作者单位】：
【分类号】：S682.31
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蝴蝶兰怎样做组织培养
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获得广东工业大学博士学位
1 .外植体蝴蝶兰的快速繁殖可选用的外植体有茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等, 其方法各异, 难度各有高低。2 .采样、消毒与初代培养选用的外植体不同, 其采样、消毒与初代培养的方法也不相同。下面分别就各种方法做一介绍:(1 )花梗腋芽培养将蝴蝶兰花梗剪下, 用75%酒精棉球擦拭, 切成约5 厘米的每节带芽小段, 仔细除去苞片, 防止伤及嫩芽,然后用2%次氯酸钠溶液消毒20 分钟, 其间不停地摇动。消毒后用无菌水冲洗3～5 次, 放到培养皿中。用4 号解剖刀将两端各切去0 .5 厘米, 芽体朝上插接在1/ 2MS+ 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤培养基上。培养基中还需加入蔗糖20 克/ 升, 水解乳蛋白1 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 活性炭1 克/ 升, 调pH 值为5 .6。(2 )茎尖培养茎尖是组培成功率较高的部位, 但蝴蝶兰的茎尖深藏于叶片夹缝中, 分离和消毒都比较困难。茎尖的取材有两种方法: 一是将除去叶片的茎用水冲洗, 再用10% 的漂白粉溶液作表面灭菌15 分钟( 每100 毫升消毒液加1 滴吐温20 ) , 除去叶原基后, 再用5% 漂白粉液灭菌10 分钟, 然后用无菌水冲洗。切取茎尖和各叶基部的腋芽, 大小约2～3 毫米, 接种到培养基上,用添加15%椰乳的V&W 培养基进行液体培养,或加9 克/ 升琼脂进行固体培养。培养温度为25 ℃ , 光强2 000勒克司, 每天光照时间为16～24 小时。液体培养以160 转/ 分钟速度做震荡培养, 7～10 天再转至新培养基。从开始培养算起, 1个月后转到固体培养基。在这种条件下培养1 个月即可形成原球茎状球体, 以后可继代增殖。二是先诱导花梗侧芽成为植株, 再利用试管苗的茎尖进行培养。其方法是: 在双目镜下剥取约0 .3 毫米大小的茎尖, 接种到MS(附录表1 1) + 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤固体培养基上, 在温度( 25±2 ) ℃ , 光强1 500 勒, 每天光照10小时条件下培养。14 天可见茎尖膨大, 呈浅绿色半球状, 3 个月后, 长成桑果状原球茎状体, 组织块6 毫米。此方法最大的优点是免去了外植体消毒的程序, 成功的可能性较大。(3 )花梗节间的培养正在伸长的蝴蝶兰幼嫩花茎具有分化原球茎的能力, 因此可采用快速伸长的花梗节间作培养材料。从花梗可见至其后的45 天之间, 全部幼嫩花序以及花梗等具有细胞分裂能力的节间组织, 最有利于诱发原球茎形成, 成功率可达62 .9%～77 .1%。从第一花蕾可见起, 随花梗的发育分化, 原球茎的比率下降, 能作为外植体的节间也愈短。具体操作方法为: 切取花梗节间, 进行表面消毒, 然后斜切成1～1 .5 毫米厚的薄片, 平放在固体斜面培养基上。培养基配方为: 1 .2 倍的V&W无机盐, 加100 毫克/ 升肌醇, 维生素B1 、B6 和烟酸各0 .5毫克/ 升, 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤, 2% 蔗糖, 0 .8%琼脂。置温度(26±2 ) ℃ , 光强500 勒, 每天光照16 小时的环境下培养。(4 )叶培养从3～4 月龄蝴蝶兰植株上取幼叶, 用自来水冲洗干净。在超净工作台上, 叶片用75% 酒精消毒30 秒, 然后用无菌水清洗2～3 遍, 再用0 .1%升汞溶液浸泡11 分钟, 最后用无菌水冲洗4～5 遍。用无菌手术刀将叶片切成5 平方毫米左右大小的小块, 平放或按极性接种在MS+ 3 .0 毫克/ 升6苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸诱导培养基上( 培养基中加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升) , 近轴面向上。培养条件为: 温度25～28 ℃ , 光强1 600～2 000 勒, 每天光照10～12小时。幼叶切块在诱导培养基上培养1～2 个月后, 从每个叶片组织块上可产生1～7 个不等的原球茎。(5 )根组织培养取正在培养的花梗苗, 切取根尖长约1～1 .5厘米, 并用解剖刀切去尖端约1 毫米, 露出根的分生组织, 接种于根尖诱导培养基MS+ 8～12 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5～1 .0 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳, 附加3% 蔗糖, 培养基中加入一块泡沫海绵, pH5 .4～ 5 .6; 液体震荡培养( 30 转/ 分钟) , 培养温度( 27±2 ) ℃ , 光强1 000～2 000 勒, 每天光照10 小时。20 天左右材料膨大且表面颜色明显变深, 60 天后根分生组织部位开始有分化芽, 分化率约为60%。再过45 天左右, 切下分化芽, 转入原球茎诱导培养基2/ 3MS+ 1～3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 ～1 .0 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳, 加蔗糖3% , 琼脂0 .7%。经2 个月可形成原球茎。3 .继代培养蝴蝶兰早期原球茎状球体外观象瘤状愈伤组织, 继续培养可见表面突起一个个圆球, 部分表面细胞分化出根毛状物。在原球茎球状体形成后, 无菌条件下将原球茎取出切割成几小块, 切块不可太小( 直径& 2 毫米) , 转入MS+2 .0 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 毫克/ 升萘乙酸( 加蔗糖20克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升)继代培养基中, 进行增殖培养。或在原球体的诱导时, 以1/ 2MS 为基本培养基, 激素以2 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸, 配方中均加入糖20 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 调pH 值5 .6 , 也可获得理想的效果。培养60 天左右, 再进行分割转移。通过这种方式, 原球茎可成倍增长。4 .小植株的培养将不需继代的原球茎, 在无菌条件下, 切开丛生小植株, 将小植株转入育苗培养基上培养。育苗培养基可选用1/ 2MS+ 1 .5 毫克/ 升吲哚丁酸+ 0 .05 毫克/ 升萘乙酸, 并加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 活性炭5 克/ 升, 椰汁200毫升/ 升; 或2/ 3MS+ 香蕉100 克/ 升, 加蔗糖30/ 升,琼脂7 克/ 升。此后, 将其转入1/ 2MS+ 0 .8 毫克/ 升萘乙酸的生根培养基。不久, 小植株生根。当小植株长到一定大小时, 移入温室。切离丛生小植株时, 基部未分化的原球茎及刚分化的小芽应接入诱导培养基中, 作为种苗。一段时间后, 将长大的种苗移出, 种植, 小苗及原球茎可继续增殖与分化。5 .试管苗出瓶移栽当小植株长至4 厘米左右, 叶3～4 片,根2～3 条时, 即可移栽。此时将小植株带瓶移入温室内, 1～2 周后, 再将瓶塞半开或完全打开炼苗3～5 天后, 取出组培苗, 用自来水洗净其根部的培养基, 将根部放于50%多菌灵水溶液中消毒2小时, 药液浓度为1 000 倍, 晾干后即可栽植于水苔穴盘中。刚定植的植株, 温度白天以20～25 ℃为宜, 夜间以18～23 ℃为宜。以后, 温室内日温以25～29 ℃为宜, 夜温以20～24 ℃为宜。湿度以80%～90%为好, 以后逐渐保持在70% 左右。初期光照不宜太强, 一般以1 500～2 500 勒为佳。多采用遮阳网, 春秋用一层遮阳网遮光50%左右, 夏季用双层遮阳网, 遮光70%左右, 冬季可适当减少遮荫。缓苗后(两周左右) 逐步提高光照强度至6 000～8 000勒。蝴蝶兰根部忌积水, 水分过多, 易引起根系腐烂。刚出瓶的小苗应勤补水, 中苗或大苗根据干湿程度浇水; 一般情况下, 在盆内基质表面已变干, 盆面水草微发白时再浇水。春季可4～5天浇水1 次, 保持盆内基质潮湿即可。浇水时要让整个基质湿透。浇水时间以上午或清晨为佳。幼苗移栽初期不可施肥, 定植后1 个月,可喷施液肥。
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蝴蝶兰组培生产技术及污染防治技术报告.doc 14页
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专业：现代设施农业
班级： 10设施2班
新疆农业职业技术学院生物科技学院专题报告
蝴蝶兰组培生产技术及污染防治
院：生物科技学院
业：现代设施农业
名：秦政文
级：10设施2班
指导教师：韩阳花
二О一二年十二月十二日
1.蝴蝶兰组培技术 4
1.2母瓶增值（F瓶阶段） 5
1.3中母瓶（H瓶阶段） 5
1.4子瓶（K瓶阶段） 6
2.蝴蝶兰组培造成污染的原因 6
2.1操作人员不严格遵守无菌操作规程 6
2.2湿度过大 9
2.3培养瓶瓶盖的选择不合理 9
2.4其他原因 10
3.蝴蝶兰组培污染的防治方法 10
3.1.操作人员严格遵守无菌操作规程 10
3.2湿度的控制 10
3.3硅胶圈盖的使用 11
3.4其它方面 12
4发展前景及展望 13
参考文献 14
近年来，花卉产业在我国逐渐兴起，蝴蝶兰以品种丰富、花色鲜艳、花期长深受人民群众的喜爱，成为盆花中流行之首，正因为如此，市场上大的需求量致使蝴蝶兰工厂化模式生产，由于蝴蝶兰靠自然无性繁殖，繁殖率极低，所以工厂化模式生产以组织培养技术的手段才能满足国内外市场需求，本文根据自身实习经验，总结出一套详细的瓶苗操作技术流程规范并重点从防治瓶苗污染为内容，从操作规范、湿度控制、瓶盖选择等方面提出了改进的方案，旨在降低瓶苗生产的污染率，促进工厂化生产，并希望能够给企业及今后从事组培生产的行业提供理论依据。
关键词： 工厂化 防治污染 操作规范 湿度控制 瓶盖选择
蝴蝶兰属兰科蝴蝶兰属植物，该属约有40余个原种，分布于亚洲与大洋洲热带和亚热带地区。我国云南南部、西藏南部、广东南部、海南及台湾为该属植物的最北分界线。其多生于阴湿多雾的热带森林中离地3-5m的树干上，也有生长于溪涧旁的湿石上，具有极高的观赏价值和经济价值。
蝴蝶兰为典型的单茎型附生兰，植株很少发生侧枝，分株繁殖系数极低；其种子内不含胚乳，自然条件下很难萌发，发芽率极低，故自身的营养繁殖和种子繁殖均难以满足大量的繁殖需要。种子无菌播种萌发产生的实生苗变异性大，不能良好的保持也会出现品种退化的现象，进而导致种苗质量差。应用植物组织培养技术进行蝴蝶兰快速繁殖可以缩短繁育周期，获得大量成株，并且可以保持优良性状，维护种质资源。目前，蝴蝶兰快繁途径主要利用各种外植体诱导类原球茎（Protocorm-like body. PLB），进而诱导分生苗实现快繁，不经愈伤组织直接诱导丛生芽实现。
蝴蝶兰的组培技术运用于工厂化才能满足国内外的市场需求，因此在组培生产中操作技术及培养管理不容忽视，又因蝴蝶兰种苗繁殖主要采用组织培养，在此之中瓶苗的无菌生产是组培技术之中的重中之重，也是促进工厂化生产的重要因素，在组织培养中，无菌生产过程中避免不了产生污染，为提高瓶苗的成活率，促进工厂化的生产，降低污染率是重要途径，本文把实习工作中的组培技术实践介绍给大家，着重从防治瓶苗的污染为内容，发现问题提出解决办法，促进工厂化生产。
1.蝴蝶兰组培技术
蝴蝶兰瓶苗主要分四个阶段：1.诱导；2.母瓶增值；3.中母瓶；4.子瓶
状态：（1）长约2cm的带饱满腋芽的切段或1-1.5cm长的花梗节间；
（2）芽苗上的无菌叶片；
操作方法：(1)将消毒后的长约15cm的花梗，用消毒后的剪刀将中部的花梗剪成长约2cm带饱满腋芽的切段或1-1.5cm长的花梗节间；
(2)无菌叶片切成0.5cm见方即可
培养目标：（1）用花梗诱出营养芽；
（2）用叶（主要用的外植体）诱导出PLB（类原球茎）；就是说让离体外植体诱导出营养芽或类原球茎；
培养基种类：（1）MS+BA 3.0-5.0mg/L和改良MS培养基+6-BA 5-7.5mg/L+NAA 0.5-1.0mg/L+CM(或香蕉泥、马铃薯汁)15%;
（2）MS+NAA 5.0mg/L+KT 10mg/L+10%CM；
培养条件：（1）花梗接种于试管（建议原因单株不易交叉污染，节省空间），暗培养7-14d后，置于25-28℃、光强lx、光照10-12h/d；
（2）PLB可以接种于无菌瓶中，置于25℃、光强500lx、光照16h/d下培养；
培养结果：（1）3-4周腋芽膨大变绿，6-8周腋芽伸长并在基部产生丛芽，30d长出小叶，55d后长出4-5片叶的单株小芽苗；
（2）30d后叶片切口四周萌发许多原球茎；
1.2母瓶增值（F瓶阶段）
状态：花梗产生的丛生芽与叶片产生的原球茎;
操作方法：（1）丛生芽，单株1cm以下（含1cm）将附生的芽（双芽）一起转接，1cm以上切分开转接，切
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蝴蝶兰产业发展之我见 别让组培“绊倒”蝴蝶兰产业
中国花卉报
甘文举&&日期：
在国内，蝴蝶兰产业发展至今不过短短十几年时间，才刚度过少年时期，逐渐步入成熟期，而其中的组培环节因为投资规模较大、技术门槛过高、新品种选育周期过长等因素，目前涉足它的人还不是太多……
8月31日消息：在国内，蝴蝶兰产业发展至今不过短短十几年时间，才刚度过少年时期，逐渐步入成熟期，而其中的组培环节因为投资规模较大、技术门槛过高、新品种选育周期过长等因素，目前涉足它的人还不是太多。而在产业发展过程中，不断有各种各样的问题暴露出来，最为突出的就是有些种苗组培企业对品种的筛选不够细致、技术把握不够精准、质量管控不够严谨、出货标准不够统一等，导致下游生产企业买回的苗株生长状况不好，会出现大规模变异，催花不理想，成品花出棚后上架时间短、不耐放等等，从而给种植户及经销商带来巨大的经济损失，组培已成为制约产业发展的绊脚石。本人从事蝴蝶兰种苗组培生产及销售工作多年，想就上述话题谈谈自己的看法。&
在过去的十多年里，国内能供应蝴蝶兰种苗的企业仅有十多家，而蝴蝶兰种植户却在翻倍增长，种苗供不应求，由于早些年成品花的价格及种苗的价格都非常高，利润空间也非常可观，市场给了组培企业一个很好的发展机会。然而在经济利益的驱使下，不少组培厂家为了赢取更大的利润，没有时间去精雕细琢选育品种，也没有精力去花费时间优化技术，更没有必要去制定行业的出货标准，只要能生产出产品，无论品种好坏、质量如何，都统统能销售出去。由于前些年蝴蝶兰的利润较大，大家都赚得盆满钵满，就算是有些损失也都自己承担了。然而经过这几年的发展，蝴蝶兰产业已经脱离了暴利阶段，随着种植成本的增加、销售价格的降低、竞争的日益激烈，蝴蝶兰产业已经开始步入平均利润甚至是微利时代。当竞争加剧和利润有限带来的经济损失承受不起时，种植户一旦遇到苗株长势不好、变异率过高等问题，就会开始对种苗组培厂家说&不&了。&
总而言之，产业的发展、格局的提升、竞争的加剧，导致组培行业发生着巨大的变化，种植企业对种苗品种和品质的要求在快速提升，种苗组培企业也一样，势必要对自己的未来和发展寻求良方，如果品种不严谨、技术不改善、品质不提升，就会被市场淘汰。&
本人认为，制约组培企业发展的因素主要有三个，一是技术人才匮乏。组培行业是技术导向型企业，好的技术人才显得尤为重要，人才成为制约组培企业的最大瓶颈。二是育种周期太长及新品种选育困难。国内组培企业能自己育种、筛选品种进行繁育的寥寥无几，大多数都是购买别人的品种进行生产繁殖，之后再进行销售。而购买回来的新品种也需要很长时间去种植观察，了解其性状才能进入组培生产，这也需要不短的时间，这会考验组培企业掌门人的耐性。急于向市场推出自己都没有掌握习性的新品种来赚取利润，这种不负责任的做法必将带来严重的后果。三是缺乏改善和优化培养基配方及病毒检测等关键技术体系。每一个蝴蝶兰品种都有不同的生长习性及性状，对培养基的要求也有所差异，现在国内有几家优秀的组培企业，它们有着共同的特征，即品种品质确实过关，因为他们对品种、培养基配方不停地进行试验及优化，找到与品种最匹配、最适合生长的基质，因而产品是最优秀的。现在有不少企业往往有几十甚至几百个品种，或者三天两头有新品种推出，可不就会这个有问题，就是那个出问题？只有专一、专注、专心，才能推出上品。此外，现在国内生产企业都感觉到苗株病毒给生产带来的危害，选育花梗进行病毒检测、规范病毒控制范围已经成为组培企业不可不做的功课。未来市场对组培产品的要求会更高，对苗株的病毒问题也会更加重视，组培企业早日进入病毒检测及控制阶段是对自己企业发展及下游企业的成长负责，早进入就早受益。
（作者系陕西西安卉杉生态科技有限公司总经理）
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(来源：中国花卉报
蝴蝶兰 产业 发展 组培