实时荧光定量pcr结果数据差别很大，怎样处理

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-10-02 14:53 标签： 实时荧光定量pcr结果

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问题已解决悬赏丁当:10

请教：如果用deltadeltaCT法比较两种疾病中病人microRNA表达差异数据怎么处理呢
实验组和对照组都有多个样本，每个点做三个副孔。ABCD代表平均CT值。那么，我如何确定deltadeltaCT的值呢？是任意选择一个样本作为对照呢？还是选择其中一组计算其所有样本的平均CT值作为参照呢？抑或别的方法......
请各位大侠帮忙，能举个例子，说明其原理最好了，如果有相应的文献那就更好了~~谢谢~~
  • 政治敏感、违法虚假信息
独立三次重复试验，每次作3个复孔，然后根据下列公式计算相对表达量：
a.分别计算试验组和对照组的ΔCt值
ΔCt试验=Ct目的基因-Ct内参基因
ΔCt对照=Ct目的基因-Ct内参基因
注：Ct目的基因和Ct内参基因是三个复孔Ct值求得的均值
独立三次重复后，试验组和对照组分别得到三个ΔCt值，然后以各组的ΔCt进行t检验，从而近似的评估目的基因相对表达差异。Pc.计算相对表达量
相对表达量是指目的基因在试验组中的表达是目的基因在对照组表达的多数倍。在P-ΔΔCt小于1说明目的基因在试验组中表达下调，大于1说明目的基因在试验组中表达上调。否则表达无差异。
  • 政治敏感、违法虚假信息
我当时做的时候是利用10倍稀释后做标准曲线，利用标准曲线将内参和目的基因进行还原，然后用目的基因的浓度除以内参的浓度就得到目的基因是内参的倍数，利用倍数比较两种疾病病人目的基因的变化。
由于做标准曲线是没有办法测具体浓度，而在计算是，只是利用的倍数，所以没关系，只能相对定量。
  • 政治敏感、违法虚假信息
我当时做的时候是利用10倍稀释后做标准曲线，利用标准曲线将内参和目的基因进行还原，然后用目的基因的浓度除以内参的浓度就得到目的基因是内参的倍数，利用倍数比较两种疾病病人目的基因的变化。
由于做标准曲线是没有办法测具体浓度，而在计算是，只是利用的倍数，所以没关系，只能相对定量。
其实，做这个相对的标曲可以看到扩增效率。
  • 政治敏感、违法虚假信息

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