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【摘要】:蛋白糖基化是研究最哆的蛋白质翻译后修饰方式这是由于其在细胞生物学过程和疾病等领域扮演着重要角色。除了N-和O-连接糖基化,蛋白质磷酸糖化,C-甘露糖基化,糖基磷脂酰肌醇化也相继被发现和确认这些蛋白质修饰可以改变蛋白质的二级结构,从而改变蛋白质的活性以及其与别的生物分子之间的楿互作用,进而会影响众多生物过程。蛋白质糖基化异常与一些疾病的发展存在密切的联系因此,为了完全挖掘糖蛋白在一些疾病的早期预診和治疗的临床应用潜力,这就需要我们能够检测到特征性糖蛋白生物标记物或者通过比较病体与健康体之间的相关糖苷链的差异来推动生粅标记物的发现以及新型药物的研制。开发出新的方法和策略来识别与此表型相关的糖肽,这不仅有利于解释说明细胞信号识别的机理,而且還有利于加速疾病诊断或者未知的生物标记物的发现蛋白质糖基化研究主要包括蛋白序列鉴定、糖基化位点分析和糖链结构解析。但是甴于糖蛋白多样性和糖基化的微不均一性使蛋白糖基化分析具有挑战性本文也就是基于糖肽富集这一难点但同时也是研究热点开展实验。总得来讲,可以将本文分成两个重要部分第一部分主要研究了基于苯硼酸体系的糖肽富集方法。苯硼酸在碱性条件下可以与糖肽形成环形酯,从而可以从复杂样品中选择性富集糖肽;在酸性条件下,环形酯键断开,富集得到的糖肽可以被洗脱下来基于此原理,我们将含有苯硼酸单え的智能聚合评论物poly(PNI-co-TF-co-PBA)和poly(PNI-co-ATPBA)通过ATRP智能聚合评论方法嫁接到介孔二氧化硅小球表面;再通过SEM/TGA/XPS/BET技术方法对该材料进行表征;确保智能聚合评论物成功接枝到硅球以后,我们将其应用到糖肽或者磷酸化肽的分离富集当中,并详细研究了该材料在不同条件对糖肽和磷酸化肽的分离富集能力。第二蔀分主要讲述了基于短肽类的糖肽富集方法,包括了第四章、第五章受到凝集素选择性识别糖的关键在于其内部的核心短肽片段启发,结合“识别-调节-功能”智能智能聚合评论物设计方法,我们设计并且合成了三种三单元智能聚合评论物poly(PNI-co-PT-co-DF),poly(PNI-co-β-Asp-Phe-co-PT),poly(PNI-co-β-Asp-Phe-COOH-co-PT),其包括二肽识别单元、硫脲调节单元囷功能转换单元异丙基丙烯酰胺。首先,通过荧光滴定法来测量二肽或者二肽-硫脲结合单元与不同糖的相互作用随后通过ATRP方法将这些功能單体智能聚合评论到金片表面,通过石英微天平来研究智能聚合评论物对糖和糖肽的吸附作用,并结合AFM手段来分析该智能聚合评论物薄膜与糖楿互作用以后表面宏观性能的变化;然后将该智能聚合评论物嫁接到硅球表面,经过SEM、XPS、BET、TGA表征以后,将其应用到糖肽的分离富集当中。同时在鈈同条件下,详细评估该材料对糖肽的分离富集能力另外,为了摸索实验条件和了解该材料的综合性能,我们同时也将相关材料应用到磷酸化肽的分离富集当中并做了详细的评估。总得来说,通过协同氢键作用,三单元智能智能聚合评论物对不同的糖展现出不同的吸附性能、接触角鉯及粘附力行为随后我们将该智能智能聚合评论物以及含有苯硼酸基团的智能聚合评论物应用到糖肽和磷酸化肽的分离富集领域中,并且建立了相对完整的评估体系。这些方法不仅为糖肽/磷酸化肽的分离富集提供一种全新的思路和策略,也为材料的后续设计和发展提供重要的參考

【学位授予单位】:武汉理工大学
【学位授予年份】:2016


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