土壤过氧化氢酶活性的计算测定

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-09-10 14:06 标签： 土壤过氧化氢酶活性的计算

土壤酶活性测定方法 土壤脲酶的測定方法 脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素水解的最终产物是氨和。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得本方法。1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184柠檬酸和147.5氢氧化钾溶于蒸馏水将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7用水稀释至1000。 4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5苯酚溶于少量乙醇加2甲醇和18.5丙酮，用乙醇稀释至100（A）存于冰箱中；27NaOH溶于100水（B）。将AB溶液保存在冰箱中使用前将液各20混合，用蒸馏水稀释至100 5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%溶液稳定。 6）氮的標准溶液： 精确称取0.4717硫酸铵溶于水并稀释至1000ml得到1ml含有0.1mg氮的标准液称取5g以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同整个实验设置┅个对照不加土样，其他操作与样品实验相同以检验试剂纯度以24小时后土壤中NH3－N的毫克数表示土壤脲酶活性NH3－N毫克数NH3－N毫克数NH3－N毫克数α-或者β-萘酚磷酸钠等。现介绍磷酸苯二钠比色法 二、试剂 1）缓冲液： 8g NaOH溶至1L. 取50ml 0.05mol/L 硼砂溶液加23ml 0.2mol/L NaOH溶液稀释至200ml. 2）0.5% 磷酸苯二钠（用缓冲液配制） 3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：称取0.125g氯代二溴对苯醌亚胺，用10ml 96%乙醇溶解贮于棕色瓶中，存放在冰箱里保存的黄色溶液未变褐色之前均可使鼡。 4）甲苯 5）0.3%硫酸铝溶液 6）酚标准溶液 酚原液：取1g重蒸酚溶于蒸馏水中稀释至1L，存于棕色瓶中 酚工作液（0.01mg/ml）：取10ml酚原液稀释至1L。 三、操作步骤 称5g土样置于200ml三角瓶中加2.5ml甲苯，轻摇15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱37℃下培养24h。然后在培养液加入100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线方法显色用硼酸缓冲液时，呈现蓝色于分光光度计上660nm处比色。 标准曲线绘制：取0、1、3、5、7、9、11、13ml酚工作液置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml硼酸缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂显色后稀释至刻度，30min后在分光光度计上660nm处比色。以显色液中酚浓度为横坐标吸光值為纵坐标，绘制标准曲线 注意事项: 1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的水代替基质其他操作与样品实验相同。整个实验設置一个对照不加土样其他操作与样品实验相同以检验试剂纯度毫克数毫克数毫克数3,5- 二硝基水杨酸比色法蔗糖酶酶解所生成的还原糖与?3,5- ②硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。 酶促反应试剂：基质%蔗糖pH5.5磷酸缓冲液甲苯 葡萄糖标准液（1mg/mL） 预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后移至50mL嫆量瓶中，定容摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象则应弃之，重新配制 ?3

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