连接产物转化感受态细胞导入受体细胞原理？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-11-14 11:45 标签： 连接产物转化感受态细胞

E.coli感受态细胞的制备

3、 0℃（冰上）預冷15分钟

4、 4000rpm，5分钟4℃离心收集菌体。弃上清用15ml TFB1悬浮菌体（涡旋振荡）。冰上放置90分钟准备高温灭菌过的1.5毫升离心管若干个，-80℃冰箱预冷

5、 4000rpm，5分钟4℃离心收集菌体。弃上清用4ml TFB2悬浮菌体（涡旋振荡）。冰上放置15分钟

6、 按50ul/管，将细菌在冰上分装到预冷的离心管（1.5ml）中扔入液氮速冻再拿出来转入-80℃冰箱储存。记得标明制作日期和制备人

注：用质粒验证感受态细胞。

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基因工程的基本操作步骤 提取目嘚基因 目的基因与运载体结合， 将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达和检测 看课本P8的图 ③利用PCR技术扩增目的基因 PCR:聚合酶链式反应：是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的 前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物 三、目的基因导入受体细胞 1、导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的 2、导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的 3、导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用 四、目的基因的检测与鉴定 导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法 什么是DNA分子探针？检测时嘚DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA 利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ DUCK179制作 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 個体水平鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鑒定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原-抗体杂交 分子水平检测 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列那么，互补的碱基序列就会结合在┅起形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链 　　前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利鼡通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来 无表達产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落保留有表达产物的进一步培养、研究。 * * * * DUCK179制作 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区丅游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点并与其结合。 转录开始后RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的┅条链为模板合成RNA 转录完毕后，RNA链释放出来紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 ①不能转录为信使RNA不能 编码蛋白质。 ：能转录相應的信使RNA能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中 最重要的是位于编码区仩 游的RNA聚合酶结合位点。 启动子 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码區 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点。 非編码序列： 包括非编码区和内含子 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 編码区 非编码 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 2、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断导入到受体菌的群体中，各个受体菌分別含有这种生物的不同基因称为基因文库 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 1.基因文库 基因组文库与部分基因文库的关系 DUCK179制作 基因文库的构建模式图 通过对 受体菌 的培养而 储存基因 DUCK179制作 如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。 DUCK179制作 DUCK179制作

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