食用菌生料怎么物理灭菌？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-07-03 04:09 标签： 食用菌培养料灭菌

消毒供应室灭菌岗位职责

/ 点击数：21 发布时间：2011年11月6日 来源：

自净式传递窗验证过程中的性能确认

自净式传递窗已经过安装检查确认和尘埃粒子测试，各性能参数符合生产要求后。在自净式传递窗紫外线消毒后，通过已经过微生物学、无菌知识等相关知识的培训的人员进行挑战性实验对紫外线消毒效果及消毒时间进行验证，确认紫外线消毒效果及消毒所需时间。 一自净式传递窗验证程序：

紫外线消毒前，将塑料管内的生物指示剂菌片无菌移入（用灭菌后的镊子）到灭菌后的培养皿中（一个培养皿放三个菌片），用灭菌后的大头针支起，尽量让菌片两面接触空气，，裸露在空气中，紫外线消毒时放在自净式传递窗内合适的位置（关键部位、离高效和回风口最远的地方），开启紫外灯及自净风机开始进行消毒，分别做在消毒开始后10分钟、15分钟、20分钟三次实验，每次结束后用无菌操作的方法（用灭菌后的镊子）将培养皿中的菌片（每次一片）移入到装有枯草芽胞杆菌培养液的塑料管内拧紧，做好状态标记，放入密封容器保存。

培养及结果观察：分别将消毒不同时间段取出的生物指示剂置于恒温箱中37℃进行培养，同时取一支未经灭菌的枯草芽胞菌片加入枯草芽胞杆菌培养液内的塑料管中作阳性对照，经48小时培养后,阳性对照的培养液应呈浑浊生长,培养液由红变黄。经灭菌后培养的菌片液体应澄清，培养液仍为原来的红色。经初步观察后再继续培养7天，结果仍与第一次观察的结果一样，则判为验证合格。根据培养的结果判断紫外线消毒的效果。

注：生物指示剂名称：枯草芽胞杆菌（Bacillus Subtilis Atcc6633） 生物指示剂性状：圆片形、红色液体 生物指示剂含菌量：5×105～6CFU/片 适用范围：气体灭菌 有效期：一年 生产厂家：上海

二 偏差处理：对确认过程中出现不符合要求的项目进行偏差处理。 1 处理方法：

2 该系统在确认过程中，应严格按照制定的系统操作程序、维护保养程序、采样操作程序、检测程序和质量标准进行操作和判定。

3 当由于出现故障或系统出现其它原因时应该作为偏差情况进行处理立即启动偏差处理，组织相关人员分析出该项目不符合标准要求的原因后，发整改通知，要求该项目负责部门或单位立即整改，整改合格后，重新进行确认，确保该项目符合标准要求，并编写偏差处理报告，内容包括：该项目负责部门或单位、发生的原因、不符合项目特征、整改过程、重新进行确认记录等相关内容。

4 重新采样：由于采样、外部环境等因素有时会出现个别采样点不合格现象，这时应考虑重新采样，符合以下要求：

（1）在不合格的采样点重新取一次。

（2）如仍不合格，分析不合格原因，并对存在问题进行整改。

（3）问题解决后重新采样，如检查合格，再重复取样一次检查，结果必须符合要求。 5 可接受标准：不符合标准项目必须找到原因，进行整改，并重新进行确认直至合格。 6.验证及评价见附件

（一） 7.再验证周期：一年

常用消毒灭菌效果评价实验操作实例

1、目的要求：熟悉压力蒸汽灭菌、紫外线消毒效果试验的检测方法。

（1）菌种：枯草芽孢杆菌黑色变种。

（2）指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌菌片、枯草芽孢杆菌黑色变种菌片。

（3）培养基：普通营养琼脂培养基、普通肉汤培养基、溴甲酚紫蛋白胨水。 （4）试剂：消毒剂及其相应的中和剂、洗脱液。

（5）其他器具：压力蒸汽灭菌器、紫外灯、无菌镊子、无菌吸管。

（1）压力蒸汽灭菌效果的检测方法：①将5片嗜热脂肪芽孢杆菌菌片分别装在灭菌的试管中，管口用牛皮纸包封，然后置在通气储物盒内；②将通气储物盒放于手提压力蒸汽灭菌器 内5个不同的位置；③103.43kPa灭菌20—30min后，以无菌手续取出菌片，放入溴甲酚紫蛋白胨水培养基中，于56%培养48h，观察培养基颜色的变化；④如所有培养基均不变色，外观澄清，说明无菌生长，则灭菌合格；如有1支培养基颜色变黄且外观浑浊，说明有细菌生长，则灭菌不合格。 （2）紫外线杀菌效果的检测方法：①取市售大肠埃希菌ATCC25922染菌的载片8个置于距紫外灯管垂直1m处，开启紫外灯照射，于30、60、90、120min4个不同间隔时间各取出2个放入盛有洗脱液的试管中，振摇80次后进行适当稀释；②取0.5ml洗脱液做倾注平板，35℃培养48h，做菌落记数；③试验同时做阳性对照，除不做照射外，其他操作同上；④计算杀灭率

杀灭率=（阳性对照组菌落数-试验组菌落数）*100%/ 阳性对照组菌落数 ⑤对指示菌杀灭率≥99.9%，判为消毒合格。达到物理检测标准时，作为消毒合格的参考标准。

药典附录上有呀，湿热灭菌用嗜热脂肪芽孢杆菌，干热灭菌用枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢，臭氧消毒用枯草芽孢杆菌

开臭氧消毒前监测结果与消毒后结果进行比较；每天臭氧空气消毒后取样监测浮游菌、沉降菌、设备表面微生物数连续监测7天，结果应符合下述规定。

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一、工业微生物育种在发酵工业中的地位

现代发酵工业之所以如此迅猛发展，除了发酵工艺改进和发酵设备更新之外，更重要的是由于菌种的选育和改良，工业微生物菌种选育在发酵工业中占有重要地位，是决定该发酵产品能否具有工业化价值及发酵过程成败与否的关键。可以为发酵工艺提供了人类需要的各种类型的突变菌株，从而使各种产品（如抗生素、酶制剂、氨基酸、有机酸等）的产量成倍甚至成千倍地增长，同时产品的质量不断提高。

因此，工业微生物育种对于提高发酵工业产品的产量和质量，进一步开发利用微生物资源，增加发酵工业产品的品种，具有重大意义。

工业微生物育种是建立在遗传和变异的基础之上的，如果没有变异，生物界将失去进化的素材；没有遗传，变异也无法积累。

二、工业微生物育种的进展

野生型微生物经自然选择，能适应它的周围环境，能适应同其他物种的竞争，但却不能按人的意志生产人们需要的物质，因此从人类的利益出发，须对工业微生物菌种进行改良。

工业微生物育种是建立在遗传和变异的基础上的，没有变异，生物界将失去进化的素材；没有遗传，变异也无法积累。因此，工业微生物育种学是建立在微生物遗传学基础上，而二者是相辅相成的。

目前菌种选育常采用自然选育和诱变育种等方法，带有一定的盲目性，尚属于经典育种的范畴。随着微生物学、生化遗传学的发展，出现了转化、转导、原生质体融合、代谢调控和基因工程等较为定向的育种方法。

工业微生物育种技术的发展经历了几个阶段

（一）自然选育：对工业微生物育种有很大的影响。例如

1、在酒精发酵中，推广了自然选育的纯系良种，扭转了酒精生产中的不稳定现象。

2、自然选育方法已沿用了多年，仍是工业微生物育种的手段之一。

3、由于自然突变频率低，单纯依赖自然界存在的微生物群体来进行的自然选育无疑有很大的局限性，进而推进了人工诱变育种的发展。

1、发酵工业中的各种优良高产菌株绝大部分都是诱变育种方法获得的菌株

2、但是，菌株长期使用诱变剂处理后，会产生诱变剂疲劳效应，还会引起菌种生长周期的延长、孢子量减少和代谢减慢等现象，这对发酵工艺的控制是不利的。所以出现了杂交育种。（三）杂交育种

1、杂交育种也应当建立在诱变育种的基础上，没有诱变育种，杂交菌株的产量是难以提高的。

2、杂交育种的主要目的在于把不同菌株的优良经济性状集中于重组体中，克服长期用诱变剂处理造成的上述缺陷，同时杂交还是增加产品新品种的手段之一。

1、是以20世纪50年代谷氨酸发酵取得成功为起点的

2、代谢控制育种的活力在于以诱变育种为基础，获得各种解除或绕过了微生物正常代谢途径的突变株，从而人为地使有用产物选择性地大量生成和积累。

近年来，基因工程在工业微生物选育种得到迅猛发展。有许多基因改造育种的方法如基因组改组（是多亲本微生物之间发生重组）、分子定向技术（是一种DNA水平的分子定向化技术）、高通量筛选（核心是根据目的样品的特性，开发出盒式的筛选模型，将样品的

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