PET-CT不能查出所有肿瘤 哪些人适合做
核心提示：肿瘤是威胁人类健康的头号杀手，要想有效的防治这种疾病，及时进行检查是十分的重要。PET-CT是当前最精准的癌症检查，检查一次价格近万，但是准确度可高达90%以上。是否做了PET-CT就能万无一失，所有人都能做？
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　　PET-CT是目前最先进最精确的查癌检查，它既可以对可疑部位的进行解剖学定位，还可以对该部位进行代谢分析，精确度非常高可达90%以上，可以检查到最低2毫米以上的。　　在临床上，PET-CT检查主要用于肿瘤良、恶性的鉴别，临床高度怀疑肿瘤时，PET-CT还可准确提供活检部位，以便及时确诊。PET-CT还可为确诊的癌症病人检查恶性肿瘤有无转移，寻找肿瘤原发灶，对恶性肿瘤进行分期、分级，以协助指定最佳的治疗方案；在肿瘤放射治疗前进行精确的生物靶区定位。对于治疗后的癌症病人，PET-CT可用于手术、放疗或化疗后的复查，看有无残余肿瘤组织，鉴别肿瘤复发与坏死等。　　4种人群适合做PET-CT检查　　1、肿瘤高危人群　　有肿瘤家族聚集现象者，该类人群比普通人更易患上肿瘤。还有就是接触高危因素的人群，如有烟酒嗜好、经常接触有毒有害物质者等。派特CT检查对肿瘤的判断准确率远远高于其他影像设备，肿瘤高危人群非常适合每年做一次派特CT检查。　　2、有癌前病变的人群　　癌前病变虽然不等于癌症，但癌前病变如、、、、等极易在不知不觉中转化为恶性肿瘤，定期做PET-CT检查有助于更早的发现。　　3、肿瘤疑似患者　　常规检查在筛查肿瘤方面准确率不高，这容易导致两个问题。一个就是患者患有癌症但检查没查出来，二个就是不是癌症被查出患有癌症。PET-CT可有效避免出现假阴性和假阳性，为疑难病例提供正确的活检部位，从而给出肿瘤良恶性的准确诊断。　　4、肿瘤已确诊人群　　很多朋友认为肿瘤一旦确诊就没必要做PET-CT了，事实并非如此。通过PET-CT检查可对肿瘤进行分期，此外还可确认恶性肿瘤有无转移病灶，这有助于合理地选择治疗手段。据报道，有近四分之一的肿瘤病人在做了PET-CT检查后，其肿瘤分期的判断发生改变，从而避免了不当的治疗方式。这有助于预防肿瘤复发，提高患者生存时间和质量。
　　PET-CT不能查出所有肿瘤 副作用大　　PET-CT是将PET功能代谢显像与CT解剖结构显像，通过计算机融合而完成的一种新的影像学诊断技术，能为确定和查找肿瘤及其他病灶的精确位置、定量、定性诊断提供依据。但判断是否为恶性肿瘤仍然只遵循一个“金标准”，即对病变组织进行病理检查。事实上，PET-CT检查并不能检查出所有肿瘤。在对原发性的诊断上，PET-CT的效果就不佳。因此，一般不给健康人作为体检项目推荐。　　国外一些研究表明，目前全身PET-CT扫描伴随着大量的辐射剂量和致癌风险。PET显像需要往身体里注射具有放射性元素的药物。目前最常见的显像剂F-FDP，就是含有放射性氟元素F的类似物。PET-CT通过探测F-PDG在体内的放射性分布，寻找葡萄糖代谢特别旺盛的恶性肿瘤。若以60公斤体重为标准，则一次PET-CT扫描的有效辐射剂量在6.34毫西弗至9.48毫西弗之间，对身体可以说是有害的。如因需使用多次，其有还风险也在累加。39健康网(www.39.net)专稿，未经书面授权请勿转载。
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petct优势有哪些 4种人群适合做PET-CT检查!
petct优势有哪些 4种人群适合做PET-CT检查!
来源：中康体检网 责任编辑：编少
导读： 　　petct优势有哪些 4种人群适合做PET-CT检查!专家介绍：PET-CT将CT与PET融为一体,由CT提供病灶的精确解剖定位,而PET提供病灶详尽的功能与代谢等分子信息,具有灵敏、准确、特异及定位精确等特点,一次显像可获得全身各方位的断层图像,可一目了然的了解全身整体状况,达到早期发现病灶和诊断疾病的目的。
　　petct优势有哪些
4种人群适合做PET-CT检查!专家介绍：PET-CT将CT与PET融为一体,由CT提供病灶的精确解剖定位,而PET提供病灶详尽的功能与代谢等分子信息,具有灵敏、准确、特异及定位精确等特点,一次显像可获得全身各方位的断层图像,可一目了然的了解全身整体状况,达到早期发现病灶和诊断疾病的目的。　　它的精确率可以说要比单单的PET或者CT的效果要高，有数据显示PET-CT对肿瘤性质诊断的准确性能够达到80%~90%以上，PET-CT是目前可以判断肿瘤性质及其全身情况的最先进的影像学设备。　　1.能够对肿瘤进行早期诊断和良恶性鉴别;　　2.确定各类恶性肿瘤的分期和分级;　　3.治疗效果评估和预后判断;　　4.早期鉴别肿瘤复发，对肿瘤进行再分期;　　5.对肿瘤原发病灶的寻找;　　6.对放疗生物靶区定位　　petct优势有哪些?温馨提醒：petct并不是人人都适用，以下4种人群适合做PET-CT检查。　　1、肿瘤高危人群　　有肿瘤家族聚集现象者，该类人群比普通人更易患上肿瘤。还有就是接触高危因素的人群，如有烟酒嗜好、经常接触有毒有害物质者等。派特CT检查对肿瘤的判断准确率远远高于其他影像设备，肿瘤高危人群非常适合每年做一次派特CT检查。　　2、有癌前病变的人群　　癌前病变虽然不等于癌症，但癌前病变如肝炎、肝硬化、胃溃疡、直肠息肉、宫颈炎等极易在不知不觉中转化为恶性肿瘤，定期做PET-CT检查有助于更早的发现。　　3、肿瘤疑似患者　　常规检查在筛查肿瘤方面准确率不高，这容易导致两个问题。一个就是患者患有癌症但检查没查出来，二个就是不是癌症被查出患有癌症。PET-CT可有效避免出现假阴性和假阳性，为疑难病例提供正确的活检部位，从而给出肿瘤良恶性的准确诊断。　　4、肿瘤已确诊人群　　很多朋友认为肿瘤一旦确诊就没必要做PET-CT了，事实并非如此。通过PET-CT检查可对肿瘤进行分期，此外还可确认恶性肿瘤有无转移病灶，这有助于合理地选择治疗手段。据报道，有近四分之一的肿瘤病人在做了PET-CT检查后，其肿瘤分期的判断发生改变，从而避免了不当的治疗方式。这有助于预防肿瘤复发，提高患者生存时间和质量。
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什么是PET/CT？哪些人适合做此项检查？
& & & &PET(正电子发射计算机断层显像，Positron Emission computed Tomography)是一种进行功能代谢显像的分子影象学设备，被誉为“分子显像”、“生命显像”，是继高能物理及基因工程之后本世纪第三个最伟大的成就。PET检查采用正电子核素作为示踪剂，通过病灶部位对示踪剂的摄取了解病灶功能代谢状态，从而对疾病正确诊断。在临床上主要应用于肿瘤、心血管和神经系统三个领域。&&&&&& 与传统的CT、MRI和超声等依靠解剖形态变化进行疾病诊断不同，PET更多的是从分子水平揭示病变的特征性代谢、功能信息，具有更高的诊断特异性。由于疾病是一个从病理代谢改变到形态结构异常的发展过程，故PET能够更早期和更灵敏的对疾病做出准确诊断。&&&&&& PET/CT是将PET（功能代谢显像）和CT（解剖结构显像）有机的结合在一起，使用同一个检查床和同一个图象处理工作站。PET/CT同时具有PET和CT的功能，但它绝不是二者功能的简单叠加，由于PET与CT优势互补，1+1大于2。PET可以显示病灶病理生理特征，更容易发现病灶；CT可以精确定位病灶，显示病灶的结构变化。PET/CT除了具备PET与CT各自的功能外，其独有的融合图象，将PET图象与CT图象融合，可以同时反映病灶的病理生理变化及形态结构，明显提高了诊断的准确性，其诊断性能及临床实用价值更高。&&&&&&&PET/CT检查适应症：1、肿瘤的早期诊断。2、良恶性肿瘤的鉴别诊断。3、恶性肿瘤分期和分级。4、寻找肿瘤原发灶。5、治疗响应、疗效评估和预后判断。6、引导肿瘤穿刺、活检和介入治疗。7、肿瘤放射治疗计划的指定。8、的早期诊断、心肌梗塞后存活心肌的判断。9、老年性诊断和病情评估，病灶的探测和定位，帕金森氏病的诊断和鉴别。10、高端健康体检，早期发现或排除肿瘤等恶性疾病。PET/CT检查注意事项：1、孕妇和哺乳妇女禁行此项检查，儿童慎行此项检查。2、需携带病历、CT、MRI、X线片、ECT片、B超报告、病理报告及其它相关检查资料。3、检查前须禁食（包括各种含糖饮料和水果）6小时以上，也不要输用含葡萄糖的液体和药物，但可以饮水。4、护士首先会给您测定空腹血糖，了解血糖水平是否达到检查要求。若血糖过高，需延长等候时间或做相应处理。5、静脉注射显像剂（18F-FDG），注射后请安静休息，避免紧张体位。6、PET/CT检查前需排空小便，避免尿液污染体表和衣裤。7、检查后尽量多饮水，促进放射性药物排出，减少辐射。
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2．甲状腺疾病：甲状腺肿瘤、甲亢、结节性甲状腺肿、甲状旁腺疾病等。要求进行颈部无疤痕的腔镜甲状腺外科手术，特别是经口腔前庭/经乳晕入路腔镜甲状腺手术。
3．胃肠外科疾病：直肠癌、结肠癌、胃癌、胃食管返流症、小肠肿瘤、肠粘连肠梗阻、慢性便秘、胰腺肿瘤、慢性腹痛和腹部疑难疾病等。
4．腹壁疝：腹股沟斜疝、直疝、股疝、腹壁切口疝、膈疝、食管裂孔疝、造口旁疝等。
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普通外科分类问答PETCT检查适合的人群？哪些人需要全身检查PET/CT?什么全身体检查能查出早期癌症？
&&&&PETCT是将PET和CT（计算机体层显像）有机结合在一起，使用同一个检查床和同一个图像处理工作站，将PET图像和CT图像融合，可以同时放映病灶的病理生理变化和形态结构，明显提高诊断的准确性。PET/CT检查一般适合哪些人群？
　　一、肿瘤病人人群　　PETCT能对肿瘤进行早期诊断和鉴别诊断，鉴别肿瘤有无复发，对肿瘤进行分期和再分期，寻找肿瘤原发和转移灶，指导和确定肿瘤的治疗方案、评价疗效。在肿瘤病人中，经PETCT检查，有相当数量的病人因明确诊断，而改变了治疗方案；PETCT能准确评价疗效，及时调整治疗方案，避免无效治疗。总体上大大节约医疗费用，争取了珍贵的治疗时间。
　　二、健康查体人群　　PETCT也是健康查体的手段，它能一次显像完成浑身检测，可早期发现严重危害人们身体健康的肿瘤及心、脑疾病，达到有病早治无病预防的目的。
　　三、颅神经病人人群　　PETCT能对癫痫灶准确定位，也是诊断抑郁症、老年性痴呆、帕金森氏病等疾病的独特检查方法。
癫痫的治疗是世界十大医疗难题之一，难就难在致痫灶的准确定位，PETCT使这一医学难题迎刃而解。经PETCT的引导，采用X－刀或γ－刀治疗，收到很不错的治疗效果。
　　四、心血管病人人群　　PETCT能鉴别心肌是否存活，为是否需要手术提供客观依据。
目前，PETCT心肌显像是公认的估价心肌活力的“金标准”，是心肌梗塞再血管化（血运重建）等治疗前的必要检查，并为放疗评价提供依据。PET-CT对早期冠心病的诊断也有重要价值。
　　现代医学认为，绝大部分疾病是体内生化过程失调的结果，PETCT可在生理状态下动态地定量观察体内分子水平的生化变化。随着人类基因的解密，对危害人类健康的肿瘤及心、脑疾病和各种遗传性疾病的产生、发展和治疗后转归，将从根本上得到认识，也可望从根本上找到有效的治疗方案。PET-CT基因显像是联接临床与基础基因研究的“桥梁”。
　　PETCT检查应注意的事项　　
　　1、受检者在检查前日晚九点开始禁食、禁酒、禁饮含糖饮料、禁静脉滴注葡萄糖、禁做剧烈或长时间的运动。可饮少量清水。做心肌检查例外。
　　2、检查当日尽可能避免与人交谈，不咀嚼口香糖等；避免紧张体位。&
　　3、PETCT中心检查时，需带齐有关资料（病历、CT、X线片、病理结果、MRI和DSA等）。 　　
　　4、在注射显像药物前后都须保持安静，并以卧位或半卧位休息，尽可能避免走动。
　　5、糖尿病病人需提前与PETCT中心联系，以控制血糖浓度。
　　6、在检查前取出身上的金属物品，检查中确保身体不要移动。
　　7、孕妇、情绪不稳定或急性持续痉挛者不宜做这项检查。来源：互联网
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以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。[请教]我想表达一个某处含连续三个Arg的蛋白，并测试其水溶性，我改选哪一个Tag？适合Pet的宿主菌如何选择? - 实验交流 - 生物秀
标题: [请教]我想表达一个某处含连续三个Arg的蛋白，并测试其水溶性，我改选哪一个Tag？适合Pet的宿主菌如何选择?
摘要: [请教]我想表达一个某处含连续三个Arg的蛋白，并测试其水溶性，我改选哪一个Tag？适合Pet的宿主菌如何选择?我的这个蛋白中间段含连续三个系有密码子，很有可能提前终止（在PGEX上已得到验证）。另外通过Protein predict预测出该蛋白58%的水溶性，所以我想选用Pet作表达，但不知该用哪一个Tag 另外，适合Pet的宿主菌哪一些可以解决我的Arg问题？ 关键词:[密码子]……
我的这个蛋白中间段含连续三个系有密码子，很有可能提前终止（在PGEX上已得到验证）。另外通过Protein predict预测出该蛋白58%的水溶性，所以我想选用Pet作表达，但不知该用哪一个Tag.另外，适合Pet的宿主菌哪一些可以解决我的Arg问题？
pET 系统已成为在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中蛋白表达的首选。该系统成功的一个主要原因是目标基因被克隆到不为大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli) RNA 聚合酶识别的 T7 启动子之下，因此在加入 T7 RNA 聚合酶之前几乎没有表达发生。克隆到 pET 载体的基因实际上是被关闭的，不会由于产生的蛋白对细胞有毒性而引起质粒不稳定。重组质粒转移到染色体上含有一拷贝由 lacUV5 控制的 T7 RNA 聚合酶基因的表达宿主中，并通过加入 IPTG 诱导表达；也可通过 l CE6 感染原始克隆宿主菌来提供 T7 RNA 聚合酶。使用大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)启动子系统 ( 如 tac 、 lac 、 trc 、 pL) 有困难的许多基因已经在 pET 系统中稳定克隆和表达。 T7 RNA 聚合酶的选择性和活性使得几乎所有细胞资源都用于为目标基因表达。诱导后几小时目标产物就可超过细胞总蛋白的 50% 。　　 新开发的 T7 驱动表达技术以 pETBlue TM 系统为代表。 pETBlue 载体包括了 pET 用于表达的优点，在目标基因克隆和质粒 DNA 操作的方面更为方便。 pETBlue TM 系统：新一代 T7 表达载体　　 pETBlue 载体代表了新型表达载体，它具备所有广受欢迎的克隆载体的最理想特点和 T7 驱动蛋白表达的完全功能。目标基因以相对于修饰的大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli) tet 启动子的反义方向插到 lacZ a - 肽编码区，因此可进行蓝 / 白斑筛选。正确定位于目标基因正义方向上游的 T7 转录和翻译信号使表达成为可能。与标准 pET 载体一样，通过转化 λ DE3 溶原菌并用 IPTG 诱导或通过 l CE6 感染原始宿主菌生产目标蛋白。 优点· 蓝 / 白斑筛选，便于克隆· 高拷贝数，质粒 DNA 高产· 以 AccepTor TM 载体或 perfectly Blunt a 载体形式提供，便于快速 PCR 克隆· 目标基因无基础水平表达，消除了毒性基因产物相关的质粒不稳定性· 表达水平与经典 pET 载体相同· 用 Tuner TM (DE3)pLacI 宿主菌实现真正的表达水平“变阻器”控制。PET 系统：大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中蛋白表达的金字招牌　　 pET 载体中，目标基因克隆到 T7 噬菌体强转录和翻译信号控制之下，并通过在宿主细胞提供 T7 RNA 聚合酶来诱导表达。 Novagen 的 pET 系统不断扩大，提供了用于表达的新技术和选择，目前共包括 36 种载体类型、 15 种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。 优点· 是原核蛋白表达引用最多的系统· 在任何大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)表达系统中，基础表达水平最低· 真正的调节表达水平的“变阻器”控制· 提供各种不同融合标签和表达系统配置· 可溶性蛋白生产、二硫键形成、蛋白外运和多肽生产等专用载体和宿主菌· 许多载体以 LIC 载体试剂盒提供，用于迅速定向克隆 PCR 产物· 许多宿主菌株以感受态细胞形式提供，可立即用于转化阳性 pFORCE TM 克隆系统具有高效克隆 PCR 产物、阳性选择重组体和高水平表达目标蛋白等特点。 pETBlue TM 系统T7 驱动的严紧控制表达、蓝 / 白斑筛选、质粒产量高 　　新颖的 pETBlue TM 系统兼有广受欢迎的蓝 / 白斑筛选载体所具有的通过目测确定重组体和高质粒拷贝数，以及 pET 载体严紧控制的高蛋白表达等特点。蓝 / 白斑筛选通过使用弱组成型大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)启动子 ( tet ) 驱动 lacZ a - 肽表达而实现，而目标基因表达由相反方向的 T7 启动子驱动。目标序列插入多克隆位点（ MCS ）破坏了 lacZ a - 肽的表达，在 NovaBlue 菌株中当存在 x-gal 时产生白菌落表型，而带有非重组载体的菌落变蓝。由于 T7 驱动的蛋白表达要求插入片段克隆到相对于 tet 启动子的反义方向，因此实际上没有目标序列的基础表达。相对于 pET 载体， pETBlue 质粒上高拷贝 PUC 复制起点增加了质粒产量，为测序、突变和其它质粒操作带来方便。 　　如果插入序列相对于 T7 lac 启动子为正义方向且符合每个载体的翻译要求， pETBlue 载体中目标基因可以高水平表达。用两种方法进行蛋白表达：用 l CE6 （ l pL 启动子控制 T7 RNA 聚合酶表达的噬菌体）感染，或转化重组 pETBlue 质粒到宿主菌 Tuner TM (DE3)pLacI 或 Origami TM (DE3)pLacI 中并用 IPTG 诱导。这些宿主菌染色体上带有一拷贝 lacUV5 控制的 T7 RNA 聚合酶基因，并通过相容的 pLacI 质粒提供足够 lac 阻遏蛋白，以确保低水平的未诱导表达。 Tuner 菌株的 lacY 状态使整个培养细胞被均一的诱导，并随 IPTG 剂量诱导有不同的蛋白表达水平。 Origami 菌株能够增强胞质中二硫键形成。 pETBlue-1　　 pETBlue-1 便于从 5" 端编码开放读码框架的插入片段表达未融合的天然蛋白。该载体 EcoR V (GATATC) 克隆位点位于强 T7 基因 10 核糖体结合位点（ RBS ）附近。含有 ATG 起始密码子或 5" 端具有一个位置合适的 G 核苷酸插入片段成为一个合适的大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)翻译起始位点。 pETBlue-2　　 pETBlue-2 提供了载体编码的 ATG 起始密码子和多种下游克隆位点。 MCS 5" 和 3" 端两套各三个重叠平末端酶切位点便于将任何插入片段克隆到读码框中。在载体确定的读码框中，这些酶产生的平末端终止于密码三联体的不同位置。因此只要插入方向正确，任何插入片段可克隆到经过合适平末端酶切割的载体的读码框中。而且，任何不含内部终止密码子的插入片段都可与 C- 末端 HSV.Tag a 表位和 His.Tag a 序列克隆到同一读码框中。 pETBlue TM PCR 克隆试剂盒方便地将 PCR 扩增 DNA 直接克隆到 pETBlue 载体中 除了含有未切割质粒的 pETBlue TM 系统， Novagen 还提供可立即插入 PCR 产物的 pETBlue 载体。已有两种试剂盒： AccepTor TM 载体试剂盒能够插入带单个 3" -dA 突出的 DNA ，如非校对 DNA 聚合酶 ( 如 Taq DNA 聚合酶 ) 的扩增产物；而 perfectly Blunt a 克隆试剂盒设计用于克隆任何末端形式的插入片段。 在 pETBlue-1 AccepTor 载体中表达插入基因的引物设计：pETBlue-1 ：用 5" 端 ATG 开始的正义引物进行扩增，能够确保在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中有效合成蛋白的 RBS 和翻译起始位点之间的最适距离。目标序列羧基端引物设计没有限制。Met---正义引物 5" -ATG XXX ---反义引物 无限制 pET 系统概述pET 系统是在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中克隆和表达重组蛋白的最强大系统。根据最初由 Studier 等开发的 T7 启动子驱动系统， Novagen 的 pET 系统已用于表达成千上万种不同蛋白。控制基础表达水平pET 系统提供 6 种载体 - 宿主菌组合，能够调节基础表达水平以优化目标基因的表达。没有单一策略或条件适用于所有目标蛋白，所以进行优化选择是必要的。宿主菌株质粒在非表达宿主菌中构建完成后，通常转化到一个带有 T7 RNA 聚合酶基因的宿主菌（ λ DE3 溶原菌）中表达目标蛋白。在 λ DE3 溶原菌中， T7 RNA 聚合酶基因由 lacUV5 启动子控制。未诱导时便有一定程度转录，因此适合于表达其产物对宿主细胞生长无毒害作用的一些基因。而宿主菌带有 pLysS 和 pLyE 时调控会更严紧。 pLys 质粒编码 T7 溶菌酶，它是 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物，因此可降低其在未诱导细胞中转录目标基因的能力。 pLysS 宿主菌产生低量 T7 溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更多酶，因此是最严紧控制的 λ DE3 溶原菌。有 11 种不同DE3 溶原化宿主菌。使用最广泛的为 BL21 及其衍生菌株，它的优点在于缺失 lon 和 ompT 蛋白酶。 B834 菌株为甲硫氨酸营养缺陷型，因此可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记。 BLR 为 recA - 衍生菌株，改善了质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列的目标质粒。两个硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株 (AD494,BL21 trxB ) ，有利于大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)胞浆中二硫键形成。 Origami TM 和 OrigamiB 菌株为 trxB/gor 双突变，这两个酶是主要还原途径的关键酶。 Origami 和 OrigamiB 宿主菌的主要优点是能形成正确折迭的含有二硫键的蛋白。新的 Rosetta TM 菌株补充了四种大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)稀有密码子的 tRNA ，改善了由于密码子使用频率不同而引起的一些真核蛋白低表达。其它菌株背景包括 K-12 菌株 HMS174 和 NovaBlue ，象 BLR 一样为 recA - 。这些菌株可稳定表达其产物可能导致 DE3 噬菌体丢失的某些目标基因。由于存在 F 附加体编码的高亲和力 lacIq 阻遏蛋白， NovaBlue 为一个有用的严紧型宿主菌。此外， Novagen 提供了 λ DE3 溶原化试剂盒，用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。表达高毒性基因或制备新的 λ DE3 溶原菌的另一替代方法是通过 l CE6 感染提供 T7 RNA 聚合酶。虽然不如用 IPTG 诱导 λ DE3 溶原菌方便，这种策略也被优先用于一些应用中。 高严紧性 T7 lac 启动子除了在宿主菌水平选择三种基本的表达严紧性， pET 系统中 T7 启动子本身提供了两种不同的严紧性选择：普通 T7 启动子和 T7 lac 启动子。 T7 lac 启动子在启动子区下游 17bp 处含有一个 25bp 的 lac 操纵序列。该位点结合 lac 阻遏蛋白能够有效降低 T7 RNA 聚合酶的转录，这样提供了在 λ DE3 溶原菌中抑制基础表达的第二种基于 lacI 的机制（除了抑制 lacUV5 ）。含 T7 lac 启动子的 pET 质粒还具有它们自己的 lacI ，确保足够的阻遏蛋白结合到操纵基因位点上。在实际应用中，为了获得最高产量的蛋白，通常应该测试多种不同的载体 / 宿主菌组合。 控制诱导的表达水平在许多情况下，表达活性可溶性最好的蛋白依赖于宿主细胞的背景、培养条件和合适的载体配置。通常，目标蛋白活性最高的条件与产量最高的条件不一致。除了根据载体 / 宿主菌组合控制 T7 RNA 聚合酶的基础表达提供不同严紧性， pET 系统还根据诱导物（ IPTG ）浓度，对目标蛋白表达提供了真正的“变阻器”控制。 Tuner 和 OrigamiB 宿主菌的 lacY 突变使这种控制成为可能。 选择 pET 载体所有的 pET 载体均来自 pBR322 ，但彼此间先导序列、表达信号、融合标签、相关限制性位点和其它特点有所不同。有两大类 pET 质粒，即转录载体和翻译载体：转录载体（包括 pET-21 、 pET-23 和 pET-24 ）表达目标 RNA ，但不提供翻译信号。它们用于从自身带有细菌翻译信号的目标基因表达蛋白。（注意：转录载体通过命名后面的一个缺失字母后缀加以区分）翻译载体含有设计用于蛋白表达的有效翻译起始信号。许多载体在读码框 a 、 b 和 c 中带有克隆位点，分别对应于 BamH I 位点的 GGA 、 GAT 和 ATC 三联体。 选择要点选择用于表达的 pET 载体通常涉及多种因素。考虑以下三个主要因素：· 所表达蛋白的用途· 所表达蛋白的已知信息· 克隆策略 pET 载体表达的蛋白用途各种各样。例如，表达量为分析级的蛋白可用于活性研究、突变体筛选和定性、筛选配体相互作用和抗原制备。大量活性蛋白用于结构研究、试剂或亲和基质制备。许多载体适合表达用于筛选或抗原制备的分析量蛋白，然而只有载体、宿主菌和培养条件组合十分适宜才可能用于大量纯化。如果需要活性蛋白连续高产，应该试验多种载体、宿主菌和培养条件组合以找到最优化结果。 任何关于目标蛋白的已知信息都有助于载体选择。例如，一些蛋白的活性要求一个或两个末端没有外源序列。许多 pET 载体能够克隆非融合序列，然而如果特定翻译起始序列不能在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中有效利用，表达水平可能受影响。在这些情况下，常可用有效表达的氨基末端序列构建融合蛋白，然后在纯化后用位点特异性蛋白酶消化去除融合序列。 LIC （连接非依赖的克隆）策略对这种方法特别有用，因为克隆操作通过肠激酶和因子 Xa 能够去除所有氨基端载体编码序列。 由于限制性位点和读码框相容性的需要，克隆策略也会影响载体选择。由于许多 pET 载体具有共同的限制性位点配置，通常可能将一次制备的目标基因克隆到几个载体中。采 PCR 克隆策略时则有不同的考虑。 LIC 载体试剂盒推荐用于此目的，可通过 PCR 制备插入片段，而不需要限制性消化载体或插入片段。 溶解性和细胞定位考虑了目标蛋白的应用和克隆策略，还应该确定目标蛋白的细胞定位和溶解性，这一点十分重要。在许多实际应用中常希望表达可溶的活性蛋白。 特定目标蛋白的溶解性取决于多种因素，包括各自的蛋白序列。在许多情况下，溶解性不是有或无的现象，载体、宿主菌和培养条件可被用来增加或减少获得的可溶或不可溶形式的比例。 PET-32 载体系列使目标序列与通常能够增加可溶性蛋白比例的硫氧还蛋白 (Trx.Tag ) 融合。新推出的 pET-43.1 系列具有通过大量系统筛选而得到的一种过量表达时具有极高溶解性的大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)蛋白 --Nus.Tag 融合伴侣，从而进一步提高了目标蛋白的可溶性。此外， trxB 突变株 AD494 和 BL21 trxB ，或 trxB/gor OrigamiTM 和 OrigamiB 菌株可用于在胞浆中形成许多真核蛋白正确折迭和活性所要求的二硫键。低温诱导（ 15 -25 ° C ）也可增加可溶性目标蛋白的比例。 获得可溶性活性蛋白的另一策略是使蛋白外泌到胞外周质中，为折迭和二硫键形成有更适宜的环境。为了达到这一目的，通常使用带信号肽的载体。 一些纯化策略可以优化胞质中不溶性包涵体的产量。抽提包涵体并溶解，然后目标蛋白在体外重新折迭 ( 如使用 Novagen 的蛋白折迭试剂盒 ) 。该过程通常产生高产量初始蛋白并防止宿主细胞中的蛋白降解。然而，重新折迭成活性蛋白的效率随不同蛋白变化很大，可能相当低。 pET-31b （ + ）载体专为产生不可溶融合蛋白而设计，提供了生产小蛋白和多肽的有效方法。 满足不同需要的融合标签如果融合序列不影响应用，生产带有 S.Tag 、 T7.Tag a 、 His.Tag a 和 HSV.Tag a 的融合蛋白会很方便后续操作，并易于通过蛋白杂交检测。这些多肽（融合序列很小），它们的检测试剂极特异和灵敏。通过使用相应树脂和缓冲液试剂盒， GST.Tag 、 S.Tag 和 T7.Tag 序列可用于亲和纯化。 使用 S.Tag 和 GST.Tag 分析试剂盒可对粗提或纯化的融合蛋白准确定量。采用一种新颖底物的 FRETWorks S.Tag 分析试剂盒可通过荧光检测到少于 1fmol 的融合蛋白。 His.Tag a 序列作为纯化蛋白的融合伴侣非常有用，尤其对那些以包涵体形式表达的蛋白来说，它可以使亲和纯化可在溶解蛋白的完全变性条件下进行。 CBD.Tag a 在低费用亲和纯化中非常有用。它们也特别适用于重新折迭（特别是带有 CBD clos .Tag a 序列的 pET-34b （ + ）和 35b （ + ））。因为只有正确重新折迭的 CBDs 结合到纤维素基质上， CBIND 亲和纯化步骤能够从制备物中去除不正确折迭的分子。任何标签可用于固定目标蛋白，但由于 CBD.Tag 序列的低非特异性结合以及与纤维素基质的相容性，使它更适合用于这一目的。 Nus.Tag 、 Trx.Tag 和 GST.Tag 序列用来增加其融合伴侣的溶解性。 Nus.Tag 和 Trx.Tag 载体与利于在胞浆中形成二硫键的 Origami 宿主菌相容。 各种融合标签和相应 pET 载体见列表。一些 pET 载体带有数个串联的融合标签，作为 5" 融合伴侣。此外，许多载体通过目标基因序列符合读码框的通读而表达末端带有不同多肽标签的融合蛋白。使用在 5" 标签和目标序列之间含有蛋白酶切割位点（凝血酶、因子 Xa 和肠激酶）的载体，可以在纯化后选择性去除一个或多个标签。 pET-30 Ek/LIC 、 pET-32 Ek/LIC 、 pET-34 Ek/LIC 和 pET-36 Ek/LIC 是细胞定位和亲和标签配置良好的代表。 pET Ek/LIC 载体 Combo 试剂盒包括所有 4 种即用型载体，可直接用于构建数种目标基因构型。 pET NusA 融合系统 43.1在大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)中生产可溶性活性蛋白 新推出的 pET NusA 融合系统设计用于克隆和高水平表达与 495aa NusA （ Nus.Tag ）蛋白融合的多肽序列。对数据库中 4000 个以上蛋白进行可溶性建模， NusA 蛋白被确认为具有最高的可溶性。在用四种不同 NusA 融合蛋白进行的试验中，大于 85% 的表达蛋白都是可溶的。 pET-43.1 载体含有 Nus.Tag 融合伴侣并与 trx/gor 突变体 Origami 和 OrigamiB 菌株相容，有利于在胞浆中形成二硫键。使用 pET-43.1 载体和这些 trx/gor 宿主菌组合可能获得二硫键结合的蛋白。 优点· 高可溶性的 N- 末端 Nus.Tag 融合伴侣· 上游 His.Tag a 、 S.Tag 和可选择的 C- 末端 HSV.Tag a 、 His.Tag 融合标签· 凝血酶和肠激酶切割位点· 多克隆位点位于所有读码框中· 与 AD494 和 Origami 宿主菌株相容，可促进表达蛋白的正确折迭 pET 宿主菌株感受态细胞所有 pET 系统宿主菌以预测试的感受态细胞形式提供，可立即用于转化。 　　（ DE3 ）指宿主为 λ DE3 溶原菌，其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到 pET 载体的目标基因生产蛋白。命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶（为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物）的 pET 相容性质粒。带有 pLysS 的细胞产生少量溶菌酶，而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达，这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。带有 pLacI 的宿主菌产生额外的抑制 pETBlue 和 pTriEx 载体基础表达的 lac 阻遏蛋白。 λ DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。 AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。 B834 为 BL21 的亲本菌株。这些蛋白酶缺陷宿主菌为甲硫氨酸营养缺陷型，可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记，从而用于结晶学研究。 BL21 应用最广的宿主菌来源，具有 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷的优点。 BL21 TrxB 菌株在蛋白酶缺陷 BL21 背景上具有与 AD494 菌株相同的硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 。由于 trxB 宿主有利于胞浆内二硫键形成，它们的使用可增加正确折迭的蛋白组分。 TrxB 突变可用卡那霉素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。 BLR 为 BL21 的 recA - 衍生菌株，能够改善质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列或其产物能够引起 DE3 噬菌体丢失的目标质粒。 HMS174 菌株在 K-12 背景上提供了 recA 突变。与 BLR 一样，这些菌株能够稳定其产物能够引起 DE3 噬菌体丢失的某些目标基因。 NovaBlue 适合 用作初始克隆宿主菌的 K-12 菌株，具有高转化效率、蓝 / 白斑筛选能力（与合适质粒）和导致优质质粒 DNA 高产的 recA endA 突变。由于存在 F 附加体编码的 lacI q 阻遏蛋白， NovaBlue 的 DE3 溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。 Origami 为 K-12 衍生的宿主菌，硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 和谷胱甘肽还原酶 ( gor ) 基因均为突变，能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似， Origami （ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner 和 Origami 宿主菌的优点于一体。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Rosetta 宿主菌从 BL21 衍生而来，可增强带有大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子 AUA 、 AGG 、 AGA 、 CUA 、 CCC 和 GGA 的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译，从而避免因大肠杆菌(Escherichia coli)(Escherichia coli)密码子使用频率导致的表达限制。 tRNA 基因由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta （ DE3 ） pLysS 和 Rosetta （ DE3 ） pLacI 中，稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。 Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶（ lacY ）突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞，从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度，表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平（通常与 pET 载体相关）。低水平表达有时可能增强难表达蛋白的溶解性和活性。 Tuner （ DE3 ） pLacI 菌株与 pETBlue 和 pTriEx 载体的表达相容。
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