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天津中益科技有限(/company/)提供实验室精制(/sell/20/)HPLC&98%
异欧前胡素
远志皂苷元
1-咖啡酰奎宁酸
1,3-二咖啡酰奎宁酸
1,5-二咖啡酰奎宁酸
盐酸巴马汀
穿心莲内酯
甘草酸单铵盐
大黄素甲醚
芦荟大黄素
二氢杨梅素
王不留行黄酮苷
丹参酮IIA-磺酸钠
二氢丹参酮I
冬凌草甲素
防己诺林碱
黄芪总皂苷
黄芪皂苷II
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【求助】没有标准品如何用HPLC定量
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这个帖子发布于4年零277天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
没有标准品如何用HPLC定量，如何判断其纯度？最近很困惑啊，还有其他测定其纯度方法吗？急问
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呵呵 就像没有尺子，你怎么量出一个人的身高？
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zhuming123 呵呵 就像没有尺子，你怎么量出一个人的身高？不一定.%potency=100%-water content%-total impurity%-(ROI%-residual solvent%)一级标准品就是这么做出来的
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面积归一化。
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cappucino008 不一定.%potency=100%-water content%-total impurity%-(ROI%-residual solvent%)一级标准品就是这么做出来的 您确认是这个公式?
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zt5518304 edited on
可以用滴定的方式，求纯度。
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zt5518304 您确认是这个公式?我手头有文献是这样算的。不过可能下面的式子更容易理解吧
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cappucino008 我手头有文献是这样算的。不过可能下面的式子更容易理解吧卡布奇诺老师，上面两个公式是不一样的：%potency=100%-water content%-total impurity%-(ROI%-residual solvent%)----(1)-----(2)(1)中（ROI%-residual solvent%）是否为笔误，是（ROI%+residual solvent%）吗？也就是标准品的重量含量为100%减去（总杂+水分+ROI+溶残）%后的结果。（2）为也就是 含量 = 色谱纯度*(1－残留溶剂%－水分%－残渣%)一级标准品标化通常情况下我们都使用（2）的公式。请指教，呵呵
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zt5518304 edited on
zt5518304 (1)中（ROI%-residual solvent%）是否为笔误，是（ROI%+residual solvent%）吗？也就是标准品的重量含量为100%减去（总杂+水分+ROI+溶残）%后的结果。第一个应该是错了，谢谢指正！
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卡布奇诺老师，我一直在找公式2的出处，您可以指点一二吗？呵呵
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这两个公式我曾经请教过一位专家。他说当杂质比较少的时候，两个计算公式结果是很接近的。我自己算了下，发现的确如此，但是当水分或干失比较大的时候，两个公式计算结果还是差异比较大的。就我个人理解，我觉得公式2更有道理，毕竟面积归一化是拿百分比来进行计算的，而且HPLC中出现的峰的总量应当为扣除水分+溶剂或干失后的总和。
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zt5518304 卡布奇诺老师，我一直在找公式2的出处，您可以指点一二吗？呵呵USP 网站上就有啊4. Data Review4. Data ReviewThe collaborator reports and raw data packages are analyzed and evaluated by the Reference Standards Scientists. All results, along with the proposed RS label text, are collated into a Reference Standards Candidate Evaluation Package for review. For quantitative standards, a purity value is calculated by a mass balance approach using the collaborator data.Calculation Valuemg of chemical substance per mg of material = [(100.0% - I) ÷ 100] x [(100.0% - Water - inorganic residue - RS - X) ÷ 100], where I = Average Total Detected Area (%) displayed by the impurity peaks in HPLC or GC method, RS = Residual solvents (% w/w), and X = Other contributions, on a case-by-case basis (% w/w).
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cappucino008 USP 网站上就有啊4. Data Review4. Data ReviewThe collaborator reports and raw data packages are analyzed and evaluated by the Reference Standards Scientists. All results, along with the proposed RS label text, are collated into a Reference Standards Candidate Evaluation Package for review. For quantitative standards, a purity value is calculated by a mass balance approach using the collaborator data.谢谢，谢谢您！
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zt5518304 edited on
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色谱是相对的分析方法，因此必须要有标准品，才能做定性定量。决定标准品必须先要经过纯化，然后才能决定其结构的正确性。有了色谱的纯度（单一峰是绝对的要求，而且要进足够的份量，可以看到0.1％的杂质），然后才能用绝对的分析方法来决定化学的纯度。所有上面提到的公式，是我们订出化学纯度之后，可以用来决定物质平衡的检验。原则上是不可以拿来做化学纯度计算的。要知道，化学纯度是根据化学方法求出的答案。不是去找其他杂质等等，然后减去其值，而得到数字。这是观念的问题。因为，我们绝对不可能把一个化学物质里面所有的成分都订出来。譬如，正负离子还有其他的微量东东。对不对？
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HPLC标准品和文献报导的出峰时间偏移了1分钟正常不？
HPLC标准品和文献报导的出峰时间偏移了1分钟正常不？（溶剂和文献有些差别）
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联系我时，请说明是在中国安防展览网上看到的，谢谢
主营产品：ELISA试剂盒，大鼠ELISA试剂盒，小鼠ELISA试剂盒，兔ELISA试剂盒，羊ELISA试剂盒，牛ELISA试剂盒，鸡ELISA试剂盒，鸭ELISA试剂盒，植物ELISA试剂盒，昆虫ELISA试剂盒
主营业务：
该商家其它产品
其它商家同类产品影响高效液相色谱仪保留时间的因素及解决对策
13:55:00& 来源：&
　　高 琳，阎 芳
　　(天津市兽药饲料监察所，天津 300402)
　　摘要：从来回波动、漂移和突然改变 3
个方面分析了高效液相色谱仪保留时间的变异性，并总结了相应的解决对策，以期为食品安全监测工作的顺利开展奠定基础。
　　当今农产品食品安全已成为世人十分关注的热门话题，食品安全监测面临着严峻挑战。高效液相色谱技术在食品安全性检测和分析方面的应用范围较广，
具有分离效率高、速度快，以及流动相可选择范围宽、灵敏度高、流出组分容易收集等优点，既可用于分离也可用于定量，更适用于各种各样化合物的分离检测。
　　影响液相色谱的因素很多， 但作为色谱定性分析依据的保留时间对试验结果的影响尤为重要。
笔者总结长期实践工作的经验，分析了高效液相色谱仪保留时间的变异性，并提出了相应的解决对策。
　　1 保留时间来回波动
　　保留时间来回波动是指保留时间无固定规律的波动，而环境温度的变化常常是造成保留时间波动的主要原因。因此在检测时，保持实验室温度的恒定，可有效控制保留时间的来回波动。
　　2 保留时间漂移
　　保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志， 同一种物质 2 次的保留时间相差不要超过 15 s， 超过了 30 s
可看做保留时间漂移，无法进行定性。
　　2.1 环境温度不稳定 保留时间的再现性需要稳定的温度， 通常实验室温度的改变以及环境大气压的变化会导致保留时间的漂移，因此，每天的实验室温差应控制在
3 ℃以内，避免阳光直射，同时仪器周围要保证足够的空间。
　　2.2 流动相组成的缓慢变化 流动相组成的缓慢变化是保留时间漂移的常见原因，例如，pH 值过高或过低、流动相没有混匀、流动相中有挥发成分。
　　2.3 色谱柱的污染 色谱柱的污染是保留时间漂移的另一个常见原因，HPLC
色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质，当柱头污染时，污染物将延长样品的保留时间。
水是较容易污染的流动相组分，所有配制流动相的水应新鲜以不超过 2 d 为宜，并通过 0.45 &m 的水相滤膜过滤，以消除由于污染对分析结果的影响。
如果应用条件许可， 可在溶解中加入 0.000 1~0.001mol/L 的叠氮化钠，同时应使用灭过菌的溶剂瓶来减缓藻类生长。
避免溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲溶液。 此外，要定期清洗色谱柱或更换新的色谱柱。
　　2.4 系统平衡
系统平衡也是影响保留时间漂移的一个重要原因，若压力稳定而保留时间呈有规律变化，多数是色谱柱未平衡好，特别是含有的流动相，需较长时间去平衡。 系统平衡通常需要
10~20 个柱体积的流动相， 而离子对试剂则需要 50 倍柱体积的冲洗才能平衡，一般需要用流动相平衡柱子 30 min，
然后用标准品重复进样看保留时间是否基本平衡，当保留时间基本平衡后再进样品。
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