请教使用FuGENE-HD转染细胞转染原理的经验

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-08-01 10:25 标签： 293t细胞转染
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fugene 6和 fugene hd转染试剂
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fugene 6和 fugene hd转染试剂
关注微信公众号小弟最近在使用FuGENE-HD转染细胞，发现除293T细胞外其他的细胞转染效率都很低（转染效率：293T约70%，山羊MSC不到1%，F9约2%，PT67约5%，人脐带血间充质细胞约10%，猪肌肉卫星细胞约15%），远远达不到说明书上说的80%。
& &&&转染步骤我是用293细胞和山羊MSC摸索过的，当6孔板中当细胞70%接触时用无血清培养液洗，之后换加2ml无血清培养液，使用2μg质粒加7μL转染试剂在opti-mem中配成100μl转染体系，之后室温静置15min，转染后5小时换液。转染过程中也注意到了转染试剂要加在液面以下，要充分混匀（反复弹起再离心）。都证明转染试剂量大时转染效率高，但MSC及其他一些细胞的转染效率就是很低。
& &&&现在我怀疑我用的枪头的问题，均是普通枪头，不知有没有影响。
& &&&总之老板2800快大洋买的试剂总转染成这个样子真的没法交差啊，望各位大侠相助，小弟不胜感激。
生物秀举人
转染效率不高不一定是转染试剂的问题，转染条件，尤其细胞的状态也是很重要的
生物秀举人
难道没人用过Roche的转染试剂吗
呵呵，我也想用fugene转染293，请问罗氏的产品价格在哪里能查到啊，找了好久都没看到
生物秀举人
用过各种转染试剂，脂质体2000，PEI，磷酸钙，attractene，megatran等，没用过roche的
生物秀举人
mantianxing12
& & 293那玩意用啥东西随便一转就有50%
& & fugene并不好使，效率还不如脂质体呢，就是细胞毒性小，操作方便
我最近也一直用Fugene-HD和lip2000去转染猪成纤维细胞，也老是很难转进去，转染率还不到万份之一，真郁闷
生物秀举人
有时候和猪的个体差异有关。我有个师姐转羊的细胞，发现从不同的个体间差异很大
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