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【求助】请教HPLC分析有关物质和含量时，一般主峰的保留时间在什么范围为益
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这个帖子发布于13年零102天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我最近有个品种主峰后紧跟的一个非对映异构体非常难分，用C8柱调流动相到主成分在40多分钟出峰时才有较好的分离，如果运行时间为主峰的3倍的话，岂不是一针要2小时了！请遵守本版发帖规范！谢谢！
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cpuwjb edited on
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如果是含量测定，可以在主峰出完以后，就可以停止了，但不得干扰下一次的含量测定。如果是有关物质测定，那么高效液相图谱的保留时间一般为主峰出峰时间的2-3倍。我建议你改变柱子或方法来测定，一般主峰的保留时间在4-10分钟之间为最佳，但如果不是复方制剂最好在20分钟以内，否则，如果报批药品，会提意见的。以上均为个人意见，请参考！
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楼上的你好。高效液相图谱的保留时间一般为主峰出峰时间的2-3倍，目的是观察是否还有别的的杂质峰出现。
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我认为你在进第一针时，可把时间设为主峰时间的3倍，主要是为了看一下后面有什么杂质，在以后的测定中，只要能让杂质全都跑出来不影响下一针就可以了，没有必要每一针都等2个小时。另外，40分钟出峰时间的确很长，最好再调整一下条件，在不影响结果的前提下尽量缩短时间，必竟时间还是很宝贵的。祝你好运！
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如果是含量测定，可以在主峰出完以后，就可以停止了，但不得干扰下一次的含量测定。如果是有关物质测定，那么高效液相图谱的保留时间一般为主峰出峰时间的2-3倍。我建议你改变柱子或方法来测定，一般主峰的保留时间在4-10分钟之间为最佳，但如果不是复方制剂最好在20分钟以内，否则，如果报批药品，会提意见的。以上均为个人意见，请参考！
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请教HPLC分析有关物质和含量时，一般主峰的保留时间在什么范围为益 我觉得主峰的出峰时间在15min以内为好,当然也不能4min5min的就出峰,因为牵扯到有关物质的时间问题,就如上面的战友说的,有关物质的保留时间一般为主峰保留时间的2~3倍,像你的样出峰时间40min就太长了,我觉得不可取.假如你用250mm长的柱子,那么不防用150mm的试试,还有调一下流动相的比例,流速合理降低也能将不能分开的峰分开啊.:D:D:D
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我最近有个品种主峰后紧跟的一个非对映异构体非常难分，用C8柱调流动相到主成分在40多分钟出峰时才有较好的分离，如果运行时间为主峰的3倍的话，岂不是一针要2小时了！sorbitol 兄，针对你遇到这种情况，我认为最好在调整一下流动相，关于柱子长短的问题，应该是柱子越长，理论踏板数越高分离度越好，我建议你用
250mm的柱子，当然调整以下流动相也是必要的，比如可以加大甲醇用量试试，对于测有关物质时的检测时间的问题我想，第一针时一定要跑足够长的时间，让所有的杂质全出来。第一针进完，以后就有数了。我们平时也是只要有关物质全出来便OK啦！！
拙见，希望有用。
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分析不是我的专长，但是否可以考虑梯度洗脱，这种情况还是应该调整HPLC系统。你现在的情况的确不好。
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谢谢各位的指导！目前我们梯度也走了，不同键合（C18和C8）和不同牌子的柱子也都试过了，不同洗脱能力的流动相和不同比例也调整过，缓冲液的pH值范围也试过，还是不行。我这个产品是个羧酸的Ca盐，请教各位大师是不是加入离子对试剂会对分离有帮助呢？
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看来这个问题可以请教我们的HPLC专家, sorbitol同志。不知你浏览过他的帖子，本人认为他的很多意见还是比较不错的。
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我认为可以考虑加入离子对试剂。这样可以缩短保留时间，增加分离度。
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我认为可以考虑加入离子对试剂。这样可以缩短保留时间，增加分离度。
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对于难分离的物质：1。改变固定相：色谱柱可以多选择一下，不单是C8和C18,还可以是CN和苯极柱2。改变流动相PH值3。加入离子对试剂你这种情况我觉得这三种方法都值得一试。
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HPLC进行有关物质含量测定时，要求图谱的保留时间一般为主峰出峰时间的2-3倍。你这个样品主峰时间太长，不适宜于药品的快速含量分析，你有否试过改变柱子，或换换流动相？一般原料药主峰的保留时间在5-10分钟之间为最佳，如果是复方制剂可以稍长，但最好也在20分钟以内。以上为鄙人浅见，近供参考。
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sorbitol 我这个产品是个羧酸的Ca盐，请教各位大师是不是加入离子对试剂会对分离有帮助呢？加入离子对试剂可能会对你的产品分离产生影响，但离子对试剂有时也会使样品的保留时间不固定，适当的加入一定浓度的离子对试剂，会使样品保留时间发生变化，会增加与其它物质的分离度。你不仿试试，不过最好买进口的离子对试剂，这样分离好，国产的都有点问题。
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一般做西药的色谱条件记录时间是20分钟，若时间超过30分钟，最好改变流动相比例，或使用梯度洗脱以增加各杂质峰的分离度，使其在30分钟内完全出完。
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可以试试改变流动相的比例，和适当增加压力
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反相，正相，离子对色谱你都试过了吗？梯度洗脱应该可以吧！你可以试试气质和液质或用薄层色谱加生物显影的方法做做啊！
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我同意湘雅前辈的观点，可以考虑换条CN柱，或别的正相柱试一试！另外，我比较好奇楼主的情况，可以用一般的柱子把光学异构体分开，即便是分离不理想！因为我也做过一个有光学异构的品种，非得用手性柱才能把它分开！所以我们做报批资料时就要做多一点工作，比如在做稳定性考察是，除了用一般柱子控制有关物质外，同时还要控制异构体！不知道你的做法是怎么样？望指教！
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soumall 我同意湘雅前辈的观点，可以考虑换条CN柱，或别的正相柱试一试！另外，我比较好奇楼主的情况，可以用一般的柱子把光学异构体分开，即便是分离不理想！因为我也做过一个有光学异构的品种，非得用手性柱才能把它分开！所以我们做报批资料时就要做多一点工作，比如在做稳定性考察是，除了用一般柱子控制有关物质外，同时还要控制异构体！不知道你的做法是怎么样？望指教！我们对于手性药物的分析一般都是用两根柱子进行的，一般异构体用手性柱（正相或反相）或非手性柱（加入手性流动相）等方法控制，其它有关物质用C8或C18等常用的反相柱控制。在稳定性研究中即考察有关物质，也考察异构体。我们现在的这个化合物具有多个手性中心，产品中除了可能有对映异构体外还必然存在非对映异构体。非对映异构体的检查当然可以用一般的柱子来进行，而且我们现在的色谱条件下的确分出了几个非对映异构体（已经通过LC-MS得到证实）。遗憾的是，我们还没有建立一个能有效分离产品中对映异构体的方法，现在只能通过中间体的控制来控制光学纯度，也就是每引进一个手性中心，就要控制光学纯度。
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是啊，如果有一种方法能一次性把光学异构体和一般有关物质都做出来就太好了！！各位兄台努力努力！
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不过大部分现在的药都是消旋体多！随着研究的深入，更多的更有效的化合物从消旋体种拆分出来，这种手性分析的工作就会越来越值得研究拉！
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其实现在有许多柱子可以将保留时间提前。比如250，4.6,5u的柱子更换为100,3.9 3u的柱子前者为waters ubandpark 后者为waters novepark，柱效一样保留时间端一倍，当然流动相一样，所以想在多长时间出峰，是可调的，一楼的更换不同填料的柱子，可以使出峰时间改变，并且峰型可以不变，只要分离度好就可以，当然4－10分钟比较好看。
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一般图谱记录时间在20分钟以内，容量因子在3~4左右。所以，主峰的保留时间应在8～10分钟较合适。
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毕业于医学院校，在医院工作，有相对丰富的护理经验
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