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多重PCR扩增试剂盒 使用说明
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你可能喜欢在一个HIV网站找到的，关于HIV核酸检测，大家可以看窗口期。【脱恐吧】_百度贴吧
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在一个HIV网站找到的，关于HIV核酸检测，大家可以看窗口期。收藏
现在很多恐友迷信HIV核酸（病载）检测。那么今天就来说说这个HIV核酸检测。核酸检测：HIVRNA基因诊断（检测病毒遗传物质，如PCR）HIV核酸检测有定性和定量两类，前者用于HIV感染的辅助诊断，后者常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。常用方法：PCR、套式或巢式PCR、逆转录PCR基本原理：在体外条件下（至少1对DNA引物，dNTP，缓冲液）DNA聚合酶催化合成与模板DNA互补的新链。意义：病毒核酸阳性一般可作为诊断病毒感染的依据，但对有些病毒（如巨细胞病毒，艾滋病毒，乙肝病毒），不能说明宿主感染状态，如急性、慢性或携带。由于PCR的敏感性非高常，实验条件要求严格，根据PCR试验结果有时尚不能确定病毒或现疾病的关系，该技术在检测不同标本，诊断不同病毒性疾病中的意义有待进一步评价。HIV RNA基因PCR检测评价：优点：敏感、特异，是目前使用的病毒学诊断技术中最敏感的技术方法；一次可检测较大量标本；能检测出与宿主细胞基因组整合的病毒核酸序列；可用于检测目前不能或不易分离的病毒。缺点：对诊断未知病毒的感染无能为力，被检测的病毒核酸序列必须已经清楚；需要较多仪器设备，试验成本较高；有试验污染的可能性。其定性检测通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结果还要进行核酸序列测定来确定：1、HIV核酸检测阴性, 只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染；2、HIV核酸检测阳性, 可作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断；3、报告核酸定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。关于定量检测：1、按照仪器读数报告结果，应注明使用的试验方法、样品种类和样品量；2、测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。注意低于最低检测限的结果不能排除HIV感染；3、应附上仪器打印的数据。读到这里有人要问了，为什么那么贵而且很多医生都说好的核酸为什么不能单独确诊艾滋不能排除艾滋了？我们先讲下艾滋病毒的分型。艾滋病病毒主要分为两型：HIV-1型和HIV-2型，它们又有各自的亚型。不同地区流行的亚型不同，同一亚型在不同地区也存在一定差异。包括我国在内，全球流行的主要毒株是HIV-1。HIV-2主要局限于西部非洲和西欧，北美也有少量报告，传染性和致病性均较低。也就是说HIV-1这种病毒比HIV-2更可怕，传染性更强，致死率更高。HIV-1和HIV-2的氨基酸序列同源性约40%～60%。HIV是一种变异型很强的病毒，尤以env基因变异率最高，根据env基因核酸序列差异性，HIV-1分为3个亚型组13个亚型：M亚型组包括A、 B、C、D、E、F、G、H、I、J和K共11个亚型。N亚型组只有N亚型。O亚型组只有O亚型。各亚型env基因核酸序列差异性平均为30%。HIV-2至少有A、B、C、D、E、F、G7个亚型，我国以HIV-1为主要流行株。已发现的有A、B（欧美B）、B′（泰国B）、C、D、E、F和G8个亚型，还有不同的流行重组型。1999年起在部分地区发现并证实我国有少数HIV-2型感染者。我们知道HIV病毒进入人体后病毒的繁殖情况是和病毒的适应性和不同宿主差异有关，据《新英格兰医学杂志》上刊文报道患HIV-1和HSV-2双重感染的妇女中，抗HSV治疗与伐昔洛韦可降低血液和生殖道分泌物中的HIV-1RNA水平，因此就不容易检测到HIV核酸。此外服用肝炎类的抗病毒药物以及抗逆转录酶类的药物均会不同程度降低血液中HIV病毒核酸水平。另有极少数的人即使感染HIV，不需服药就能够将体内病毒数控制到50（拷贝/毫升）以下，这些人通常也不能通过核酸检测判断HIV感染。病毒载量实验的关键步骤是探针(信号扩增)或引物(靶扩增)与HIV-1 RNA的杂交，亚型变化而导致的基因差异能够使HIV-1RNA的定量出现低效或错误。有些方法定量测定非B亚型，特别是A、G亚型时，有明显的低估现象。HIV-1亚型在世界各地的分布是不均衡的，如果要依据HIV-1RNA的绝对水平做出临床决定，应将所有的亚型同等地进行定量，注意同等检测不等于同等定量，因为关键部位的引物错配可能并不完全使扩增停止，但是能够显著降低扩增的效率。有报道表明，目前所用的几种用于检测核酸的试剂盒，在检测非B亚型HIV-1感染者时，或者不能检测到，或者不能正确定量病毒量。对HIV-2型和HIV-1的O组尚不能定量检测其病毒RNA。这里先做一个小结。众所周知，艾滋病为什么难以治疗的原因之一是其基因具有高度变异性。而核酸检测被检测的病毒核酸序列必须已经清楚。那么是否会出现一种现在试剂未包含的病毒核酸序列而漏检？加上上面说的，虽然核酸假阴可能很小，但是却不能排除。却是致命的缺点。在有些情况下，由于污染或非特异交叉也可能出现假阳性结果。根据报道，核酸的假阳性高达3%。因此，没有一种病毒载量测定方法被FDA批准用来做HIV感染的诊断，最可靠的诊断方法还是血清学方法。这里或许有有人要问，如果核酸有这样的缺点，为什么还要被血站广泛使用来确保血液安全？这里我们要说到核酸的用于血站血液检测的意义1、敏感，特异性。它可以对试剂包含的所有HIV病毒株进行检出。但对窗口期供血及不典型血清转换及病毒变异无能为力。虽然有后面的缺点，毕竟不能检测到的病毒株是很少部分，它可以更进一步缩短试剂包含病毒株感染的窗口期，对目前的用血安全做到目前技术所能支持的最大保护。2、一次可检测较大量标本。血站使用混合样本进行核酸检测，制备混合样品的标本数不尽相同，有的将16-32份标本混合制备1份混合样品，也有的将96份标本混合制备1个混合样品。当混样后的样品出现阳性时，需要对该混样的所有组成样品进行拆分检测，以确定最终的阳性样品。采用混样检测主要有两个原因：一是人们认为核酸检测的灵敏度比传统血清学方法高几十倍甚至上百倍，因此即使将多个样品混合后，仍然可以检测到样品中很微量的病毒核酸。另一原因是由于核酸检测过程相对比较复杂，检测步骤多，检测时间长，如果日常对每一个样品进行分别检测将导致工作量的急剧增加，并将影响到合格血液的发放速度。目前的全自动平台可以在8h内完成对400个样品的单人份检测，或者在14h内完成1000个样品的检测。以上两点核酸检测HIV对用血安全的意义。同时强调，血站所有的血液必须再次进过抗体或者抗原抗体筛查。两种同时合格才能使用。总体来说，它对保证用血安全弊大于利。现在我们说说为什么不建议恐艾者做核酸检测。1、价格昂贵，检测时间长。通常国内的核酸检测价格一千多块，基本一周出结果。11天检测，一周出结果也就是高危后18天。而对于四代检测来说，它的窗口期是12-15天，也就是说16天检测四代就可以排除98%以上。而四代的价格仅仅为核酸的十分之一，而且当天或者隔天可以出结果。当然对不差钱的人可以忽略此条。2、HIV核酸检测阴性, 只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染。不管是病毒变异，药物影响，肌体影响等原因都可以导致核酸假阴性。核酸检测阴性后都要通过抗体筛查来排除艾滋。也就说核酸阴性，必须要正常人六周复查抗体才能排除艾滋感染。对于我个人能来说真不知道有何意义。当然也有人说，上面的可能毕竟很小，不到百分之一或者不到千分之一的可能性，我很恐，我花钱买心安。那么此条也可以忽略。3、HIV核酸检测阳性, 可作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断。也就说核酸阳性，必须进过抗体筛查，WB确诊才能判定是否艾滋。由于污染或非特异交叉可能出现假阳性结果，经过统计，假阳率在3%左右。这个才是对恐友最致命的缺点。对于用血安全宁可错杀一千，绝不放过一个。核酸阳性血液可以废弃。但对恐友来说抗体/抗原筛查阳性，还可以换一种方法或者试剂验证是否假阳性。如果核酸假阳，恐友会不会想我身体有问题，身体里已经有了病毒了，现在时间不够抗体还没出来。下来就是长期的恐慌，频繁的检测。半年能脱恐是好事。对于恐友来说，核酸弊大于利。美国DHHS 颁布的成人和青少年HIV-1感染抗病毒治疗指南推荐的病毒载量测定的临床指征包括：1、怀疑急性艾滋病感染，艾滋病检测阴性或不确定时，可以进行病毒载量测定，以辅助艾滋病感染的诊断，但得出最后的诊断还需要用抗体检测方法进行确认。2、HIV抗体阳性，确定感染艾滋病。在确立艾滋病感染诊断时，可以进行病毒载量测定，目的是掌握基础的病毒载量水平，与CD4+T细胞检测结果一道，判断是否需要进行抗病毒治疗。3、未进行抗病毒治疗的艾滋病患者每3-4个月测定1次病毒载量，以监测病毒载量的变化，与CD4+T细胞计数检测结果一起，判断是否需要进行抗病毒治疗。4、开始抗病毒治疗以后2-8周测定1次病毒载量，以判断抗病毒治疗的初始效果，决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要改变治疗方案。理想的抗病毒治疗这个时期病毒载量应该下降1个log以上。5、开始抗病毒治疗3-4个月测定1次病毒载量，以评价抗病毒治疗的效果，决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要改变治疗方案。理想的抗病毒治疗应是在这个时期病毒载量应该下降到测不到的水平。6、接受抗病毒治疗的患者每3-4个月检测1次病毒载量，以监测抗病毒治疗的持续效果，决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要改变治疗方案。7、CD4+T细胞计数发生较大变化或临床出现较大改变时可随时进行病毒载量测定，以了解病毒载量波动和变化的情况。
关于中国HIV2型感染者有多少以及在哪个地区有统计过吗
现在有点恐2型的。。。
你上面都说的缺点大于优点,,都真是这样,要求全国普及这不是扯蛋么,,
这是个敏感性强的检测，只是仪器贵试剂贵得不到推广现阶段，如果每个省会都有一两个三甲配备这个检测肯定有很多人去测
那主要还是以抗体为准啊，因为很多地方没核酸，检测抗体就够了吧
今天一大早就看到这个很有知识的帖子，LZ真是好样的，给大家普及知识。其实很多恐友都觉得核酸贵才去测，认为一分价钱一分货。我以前一个回复也说过，如果核酸只要5毛那是绝对不会有人去测的。我问过专家医师，他们说核酸2-4周检测有意义，过了4周那就是浪费钱了，因为完全可以测抗体，而且目前核酸只能检测HIV-1，而抗体可以检测HIV1\2和几乎所有亚种。看到天宫兄置顶了，我希望天宫兄能一直置顶着，因为现在很多恐友都被忽悠了，特别是被那些过了窗口期还对恐友说去测核酸的某些医生，不就是想提高医院效益和知名度么？大家都懂的，鄙视。
没有说没用，怎么可能没有，那么牛逼的东西，血站都用这个筛选的！！你们特么好好在看一遍，非常有用。糙！
纯粹是个恐怖帖。楼主什么用意？吧主也很昏庸啊。还要给这帖加精置顶？一个恐艾的人，你让他知道那么多专业的知识，干嘛啊？什么亚型测不出，变易测不出，特殊体质测不出，你想吓死人啊？他测了，脱了，就行了。你这么一说，他测了，也脱不了。这就象一个癌症病人，本来情结不错，你把的什么病情、后果给他一通专业分析，他可能会去自杀。说话要看对象的，朋友，想秀专业知识，去别的地方吧。
我可以回复一句吗？我的主治医生亲口告诉我，核酸检测高危后三天就可以直接检测出血液中的HIV—RNA。我去专家门诊，专家说HIV核酸检测二周就可以排出了，抗体的窗口期在2——6周，如果你恐艾可以去检测核酸，也就是输血前核糖核酸检测，在开具的检测项目上标示人体免疫缺陷病毒核糖核酸扩增定量法。专家问我够2周了吗？我说够了，他说那没啥事。实在不放心可以6周来测抗体。这里有个问题就是主治大夫说三天就可以直接检测出HIV的RNA。专家门诊问我够2周了吗？这个时间我不知道和大家怎么解释，百度百科说核酸检测可以把窗口期缩短到11天。再一个疾控中心用的最先进的办法也是用核酸作为初筛。按照道理来说，HIV病毒已经进入人体就开始大规模复制，不说三天，二周身体内的病毒含量应该处于很高的水平，如果核酸检测检测不出来HIV的RNA那么这个最先进的技术有什么用呢国家页为什么要推广呢？如果怀疑自己感染二周就可以测试抗体和核酸检测。
楼主武汉中南医院皮肤科的HIV ag/ab 只要45块。。。
你好。我是一名恐艾患者。希望您能帮帮我。我之前不了解艾滋病和很多女性发生过无套性行为，距离最后一次性行为已经八个月。因为之前生活比较放纵，非常懊悔和自责，主要怕牵连自己的家庭。我在天津这边3个月测的丽珠三代酶链。艾博试纸。万泰三代酶链总共4家医院测了七遍。后来不放心去了北京佑安那时候四个月梅里挨四代雅培阴301、302雅培四代发光阴。特别担心重组？希望详细讲解一下他不影响检测的原因。就以上检测我还需要病毒载量吗？血站核酸定性合格。302进口四代雅培合格。301进口四代发光合格。右安四代梅里挨合格。国产也测过很多次了。我想自杀。祝您万事如意。我已经不能正常生活希望得到您的帮助希望医生得到的帮助：1：关于亚型重组影响检测吗？这个主要担心。2：血站核酸能测重组亚型吗？我8个月核酸合格。3：我知道重组亚型体内原有的父亚型母亚型也会存在。假如一个双重感染的人举例，一个AEBC重组的传染的人，在传染给我原先的单个亚型会一起传入我的体内。有没有可能只有重组亚型传入我的体内？会不会影响检测？我还需要测一下cd4看一下绝对值吗？祝您身体健康抽出一点宝贵时间帮帮我这个陌生人。谢谢昨天也就是9个月浩源核酸合格酶链三代合格
想请问一下 我老婆生产前一天做产前检测查出hiv阳性 儿子生下来之后立即开始喂疾控中心给的阻断药 到42天和3个月时2次都做了核酸DNA检测 早期诊断均为阴性 请问这样是不是意味基本排除了hiv感染 就算不能完全排除 这种概率有多大呢 儿子现在10个月了 在7个月的时候生了一次病住院 重庆儿科医院当时做了一个抗体检测是阳性 现在好担心 请帮忙解答一下 谢谢
想请问一下 我老婆生产前一天做产前检测查出hiv阳性 儿子生下来之后立即开始喂疾控中心给的阻断药 到42天和3个月时2次都做了核酸DNA检测 早期诊断均为阴性 请问这样是不是意味基本排除了hiv感染 就算不能完全排除 这种概率有多大呢 儿子现在10个月了 在7个月的时候生了一次病住院 重庆儿科医院当时做了一个抗体检测是阳性 现在好担心 请帮忙解答一下 谢谢
拜托楼主去查询下美国罗氏核酸检测仪，这个也是全国血站正在普及的核酸检测仪，看看你文献里说的hiv病毒分型在检测类别里面没有？我们不迷信科学，但是更应该尊重科学。
而东莞市中心血站早在2008年就引入了Roche cobas s201核酸筛查系统，可对HBV（乙肝）的8种基因型，HCV（丙肝）的6种基因型和亚型以及HIV-1型O组和M组，HIV-2型进行全面检测。果然超前，成果如何？其实，我们最关心的是，采用了这种先进的核酸筛查系统后，血液安全性能提高多少？生物通 研究表面，核酸检测能将乙肝病毒检测的窗口期从原来的59天缩短到34天，能将丙肝病毒检测的窗口期从原来的82天缩短到23天，能将艾滋病毒检测的窗口期从原来的21天缩短到11天。根据东莞血站检验科的王德文主任介绍，增加核酸检测以来，仅东莞地区，5年来从符合国家标准的双重ELISA检测合格的血液中共检出了339例阳性（感染HIV，HCV或者HBV），阳性检测率达到千分之1.07。这只是一个既非省会城市、亦非医疗资源集中的一线城市的血站的数据而已，若是北京、上海、广州这些医疗资源高度集中的中心城市，传统方法漏检的阳性数目该有多么惊人！想想全国汇总的“假阴性”数字该有多大，想想那些可能因为治疗某种疾病，却不幸因输血感染上其他传染病的人，还有可能由此付出的高昂代价，实在令人心惊！此时才深刻感到，推行更高灵敏度的血液检验手段，太必要了！
核酸的意义是什么，打算明天去查
回复 阴阴阴阴阴阴99 :
核酸的窗口期是7-11天，一般上 3天后就能百分之99检测出来，人体在 十天内，处于无抗体状态，病毒几何上升，实际和理论都无法躲避核酸的检测，当然核酸也有分类，全球最高精度是20.很多人都说，自己在疾控检测病载是0，疾控是没有这么高精度核酸的，因为疾控的金标准是 抗体，一般疾控的病毒载量在 1000拷贝以上 ，最低可能为50-100拷贝，
很多人都说确诊了没有上药，却测不出病载，病载精度是多少。这个需要说明白，而且如果真的，确诊了，体内已经有了抗体产生，血液却分析不出病载，那么这将是医生上的奇迹。
医学上没有 0 的概念，
如果没有用药物抵病毒，
是不存在说检测不出病载的，如果确诊没上药， 病载测不出，那也要分精度， 你体内有可能是
20以上的病载，导致 50-100-1000拷贝的检测不出，但是 20精度的，哪怕出现了 21，也说明检测到了病载存在感染，
所以大家不要乱吹嘘
有人 说自己没用药
确诊几个月，小4是399-420 CD8 2000+ 病载是0，那说明是 HIV放过你了，在你的体内不会繁衍，并且你是医学奇迹，这种现象，请说明检测核酸的精度是多少、如果是 疾控的 一般的医院，很可能是 1000拷贝
- 500 - 100 -50. 50的可能性已经很小了，病毒是几何上升的，请大家务必现实和理论结合！
我被朋友抓伤手臂，然后出了点血，当时我跟他说，看出血了，然后他用手摸他自己的舌头唾液马上涂在我的伤口，我说你傻的呀，他说消炎呀，然后我马上擦干净唾液然后拿矿泉水洗伤口，然后我就好担心，因为唾液接触了流血新鲜的伤口。到网上问医生吧医生说唾液有病毒不能排除。唾液不是说不属于传染液体吗？好担心好纠结，希望志愿者医生们帮忙分析，万分感谢。
混检时结果为阳性拆分时为阴性为什么？
我破套5分钟，相当于无套，对方是按摩技师，罗氏电化学发光法抗原抗体同测HIV Ag/Ab阴0.08，4周28天能排除吗？
楼主，你好。本人男，dtxj,xj。但中途脱套，GT有破皮。做完后有疼痛感。1周后，症状陆续出来，扁桃体发炎，喉咙疼，淋巴结肿大，鄂下也是。症状还在持续！3，5周市3甲医院阴。能排除多少？？到底多少天才能排除？
问一下 在香格里拉玩儿的时候半夜高反去医院急诊输液抽血会不会感染？之后在14年7月在一个私人男科捅尿道造成到现在我尿道都不适，之后到15年去医院检查了好几次hiv梅毒三甲同一个医院都是阴，之后跟老婆带套做爱 到现在一直身体都有低烧和淋巴结肿大 会不会检查不到抗体呢？最害怕的是因为那次医院捅尿道给我间接传染上 而且传染给我老婆
楼主好，行为带俩套，对象小姐，进去就射了，一分钟不到结束，自己取套时分泌物搞到阴茎上了，也担心套破，目前四周三代ELISA阴，能排除多少啊？求楼主回复，谢谢楼主
看明白了.核酸是四周前用的.四周后都可以用抗体啦.用核酸就是浪费钱了
核酸那有？难道大家都要去北京？楼主的意思超过四周就可以测三代！小地方没有四代.核酸.都去？
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RPA恒温扩增技术，能革PCR的命？
来源胜创生物&英国TwistDx公司（前身为ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增专利技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新，其产品应用于医疗诊断，兽药，工业应用，食品检测，农业，公共卫生，生物安全和环境感知等相关领域。(http://www.twistdx.co.uk)&&&日前，胜创生物公司已成功取得TwistDx的中国总代理权，TwistDx的各大产品均可在我司查询订购。&货号产品名称描述TABAS03kitTwistAmp&Basic&用于RPA快速扩增TABSRT01KITTwistAmp&Basic&RT用于逆转录RPA反应&&&TANFO02KITTwistAmp&nfo&用于末端检测，检测DNA复制反应TAFPG01kit_TTwistAmp&fpg用于real-time探针检测TAEXO02KITTwistAmp&exo用于real-time探针检测TAEXORT02KITTwistAmp&exo&RT荧光检测探针法RT-RPA&&&TAUST01kitTwistAmp&exo&+Listeriam用于李斯特菌检测TAEXOCAMP01KITTwistAmp&exo&+Campylobacter用于弯曲菌检测TFSAL01KIT_TTwistFlow&Salmonella用于沙门螺杆菌检测TGSAL01KIT_TTwistGlow&Salmonella用于沙门螺杆菌检测TFRED01KIT_TTwistFlow&RedSnapper用于红鲷鱼基因检测Devices&&TW01DeviceTwista&including&case,software&and&CD&mannualsTwista便携式real-time&RPA仪TW01chaegercarCharger&Car&for&twista&Twista充电机T16DeviceT16&device&including&caseDNA/RNA扩增恒温设备DISPENSER01Ball&dispenser&1000&micro&balls磁珠分散器TMICROBALL011000&micro&balls（additional）磁珠TW02DeviceTwiria&Device&including&case,&charger&and&CD&manunalTwiria便携式末端检测孵育器MILENIA01Milenia&Hybridtech&1&strips(purchased&with&nfo&kits)侧向流检测试纸（任何RPA和恒温扩增的扩增产物快速检测）MILENIA02Special&order&only-Milenia&Hybridtech&2&strips(purchase&with&nfo&kits)&侧向流检测试纸（任何RPA和恒温扩增的扩增产物快速检测）MILENIA01Milenia&Hybridtech&1&strips(no&nfo&kits)侧向流检测试纸（任何RPA和恒温扩增的扩增产物快速检测）MILENIA02special&order&only&-milenia&Hybridtech&2&stirps(no&nfo&kits)侧向流检测试纸（任何RPA和恒温扩增的扩增产物快速检测）摘要：恒温扩增技术是继PCR技术后发展起来的一门新型的体外核酸扩增技术。目前主要的恒温扩增技术有：滚环核酸扩增、环介导等温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列扩增和解链酶扩增。它们都具有共同的特点：恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。本文就现阶段恒温扩增技术的特点及其在动物疫病检测中的应用情况和前景做一综述。&关键词：恒温扩增；PCR&&引言：近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，基于核酸检测的诊断方法已大量建立并广泛应用于动物疾病的实验室检测中，恒温扩增技术就是在此背景下出现的。与其它的核酸扩增技术相比，恒温扩增有快速、高效、特异的优点且无需专用设备。所以它一经出现就被许多学者认为是一种有可能与PCR&媲美的检测方法，目前主要的恒温扩增技术有：滚环核酸扩增（rolling&circle&amolification，RCA）、环介导等温扩增（loop-mediated&isothermal&amplification，LAMP）、链替代扩增（strand&displacement&amplification，SDA）、依赖核酸序列扩增（nucleicacid&sequence&based&amplification，NASBA）&和解链酶扩增（helix&dependent&amplification，HAD），这些技术各有特点，这也决定了它们在动物疾病检测中的应用情况，下面就它们的原理、特点及其在动物疫病检测中的应用情况进行综述。&1&滚环核酸扩增1.&1&滚环核酸扩增的原理滚环核酸扩增（rolling&circleamolification,&RCA）是通过借鉴病原生物体滚环复制DNA&的方式而提出的[1]，可分为线性扩增与指数扩增两种形式。线性RCA&是引物结合到环状DNA&上后，在DNA&聚合酶作用下被延伸，产物是具有大量重复序列（与环状DNA&完全互补）的线状单链。线性RCA&用于靶核酸扩增仅限于一些具有环状核酸的病毒、质粒和环状染色体，线性扩增倍数为105。指数RCA原理与线性RCA&相同，采用与环状DNA&序列完全一致的第二种引物，该引物与次线性RCA&产物结合并酶促延伸，其产物又作为种探针的模板，这样一来在很短的时间内（1h），产物呈指数递增。指数RCA&可用于非环状DNA&的扩增，增倍数能达107&[2]。1.&2&滚环核酸扩增的优势与不足RCA&的优势：(1)&高灵敏度。RCA有很强的扩增能力，线性RCA&的效率可达到l05&倍，而指数RCA&的效率可达到109&倍，这一高灵敏度特性使其能够检测到单拷贝水平[3]；(2)高序列特异性。可以区分单一位点的不同模式；(3)&扩增产物经过磷酸化处理后可以直接用来测序。(4)高通量。RCA&可以在靶目标上形成闭合的环状序列，确保RCA&产生的信号集中在一点，从而实现原位扩增和载片扩增；&RCA&只要保证探针的识别段序列与靶序列互补，不需要考虑靶序列的性质，因此检测RNA&时不再需要预先进行RNA&的逆转录。RCA&的不足：（1）锁式探针常接近100bp，&合成费用较高。2000&年，Antson&DO&等采用PCR&方法在实验室合成探针，可以在很大程度上降低成本；（2）信号检测时的背景问题。在RCA&反应过程中未成环的锁式探针和未结合探针的模板DNA&或者RNA&可能产生一些背景信号。1.&3&滚环核酸扩增在畜牧生产中的应用虽然可以通过一些方法部分克服RCA&的不足，但也进一步增加了反应成本，使得RCA&在动物疾病的临床检测中不适合被采用。2&环介导等温扩增2.&1&环介导等温扩增的原理环介导等温扩增其扩增原理是基于DNA&在65℃左右处于动态平衡状态，任何一个引物向双链DNA&的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链，在此前提下利用4&种不同的特异性引物识别靶基因的6&个特定区域，在链置换型DNA&聚合酶的作用下，以外侧引物区段的3’末端为起点，与模板DNA&互补序列配对，启动链置换DNA合成[4]。2.&2&环介导等温扩增的优势与不足LAMP&的优势：（1）扩增效率高，能够在1h&内有效的扩增1-10&个拷贝的目的基因，扩增效率为普通PCR的10&倍-100&倍；（2）反应时间短，特异性强，不需要特殊的设备。LAMP&的不足：（1）&对引物的要求特别高；（2）&扩增产物不能用于克隆测序，只能用于判断；（3）由于其敏感性强，特别容易形成气溶胶，造成假阳性影响检测结果。2.&3&环介导等温扩增技术在动物疾病检测中的应用LAMP&技术从诞生之日起就被认为是***有可能代替PCR&进行实验室检测的方法。2008&年Anne-Lie&B&等应用RT-LAMP建立了猪水疱病病毒(SVDV)的诊断方法[5]，该方法对血清样本的敏感性相当于实时PCR，对粪便样品的敏感性优于实时PCR。3&链置换扩增3.&1&链置换扩增的原理链置换扩增其原理是基于在靶DNA&两端带有被化学修饰的限制性核酸内切酶识别序列，核酸内切酶在其识别位点将链DNA&打开缺口，DNA&聚合酶延伸缺口3’端并替换下一条DNA&链[6]。被替换下来的DNA&单链可与引物结合并被DNA聚合酶延伸成双链。该过程不断反复进行，使靶序列被高效扩增。SDA&的基本系统包括一种限制性核酸内切酶、一种具有链置换活性的DNA&聚合酶、两对引物、dNTP&以及钙、镁离子和缓冲系统。3.&2&链置换扩增技术的优势与不足SDA&的优点：（1）&扩增效率高，据Walker&等人的报道，采用SDA&扩增结核分枝杆菌总DNA&中的一段序列时，37℃反应2&小时后，可将靶序列扩增106&倍[7]；（2）反应时间短，特异性强，不需要特殊的设备。SDA&的不足：（1）SDA&产物不均一。在SDA&循环中总要产生一些单、双链产物，用电泳法检测时必然要出现拖尾现象。（2）SDA&产物不可能直接用于克隆，测序和表达。使得SDA&在基因工程方面没有优势；（3）SDA&产物的检测手段有待提高。目前SDA&产物检测的主导方法是荧光偏振检测，但该检测方法需要特殊的检测仪器----&荧光分光光度计，这限制了SDA&在临床的广泛应用。3.&2&链置换扩增在动物疫病检测中的应用当前SDA&方法主要应用于分枝杆菌核酸定性检测、病毒体外进化研究[23]和芯片杂交等方面，还没有运用于动物疫病的检测。4&依赖核酸序列扩增4.&1&依赖核酸序列扩增的原理依赖核酸序列扩增(NASBA)是在PCR&基础上发展起来的一种新技术。是由1&对带有T7&启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术，反应在41℃进行，可在2&h&内将模板RNA&扩增109&倍[8]，比常规PCR&法高1000&倍。4.&2&依赖核酸序列扩增的优势与不足NASBA&技术的优势在于对RNA&病毒的检测，因为：（1）它的引物上带有T7&启动子序列，而外来双链DNA&无T7&启动子序列，不可能被扩增，因此在有DNA&污染的条件下，NASBA&技术同样具有较高的特异性和灵敏度[9]；（2）NASBA&将反转录过程直接合并到扩增反应中，缩短了反应时间。NASBA&也存在许多缺陷：（1）反应成分比较复杂；（2）&需要3&种酶使得反应成本较高；（3）对DNA&病毒的检测上NASBA&就显得不是那么适合。4.&3&依赖核酸序列扩增在动物疫病检测中的应用NASBA&与LAMP&一样在恒温扩增技术中是相对成熟技术，现在已应用于动物疫病检测中。我国2004&年发布的8&项禽流感系列标准中，有两项应用了NASBA检测方法，&即GB／T~H5&亚型禽流感病毒NASBA&检测方法》和GB／Tl《禽流感病毒NASBA&检测方法》[10]。6&小结动物疫病的检测是一项特殊的检测工作，它一方面需要快速、准确的检测结果，另一方面对检测的成本也有着苛刻的要求。而恒温扩增技术在很大程度上符合了它的需要，虽然说当前把恒温扩增技术运用于动物疫病的检测还有着不少的缺陷，但它的优越性也是有目共睹的，特别是其中的LAMP&和NASBA&已经逐渐开始运用到动物疫病的检测中。我们相信通过对恒温扩增技术的不断完善，它必然会和PCR&技术一样成为动物疫病检测中不可缺少的检测手段。【参考文献】&[1]&Hobbie&J&E，Daley&R&J,&and&JasperS.&Use&of&nuclepore&filters&for&countingbacteria&by&fluorescence&microscopy[J].Appl&Envir&Microbiol，)：[2]&李影，王伟利，钱爱东.&畜产中相关食源性致病菌“活的非可培养状态”的检测策略[J].中国动物检疫，)：46-47[3]&Wu&HC,&Shieh&J&,&W&righ&t&DJ&,&etal.&DNA&sequencing&using&rolling&circleamplification&and&precision&glass&syringesin&a&high-through&put&liquidhandlingsystem[J&].&Bio&techniques,&)&:&2042207&[4]孙晓媛，钱爱东，李影.&三株沙门氏菌VBNC&状态诱导条件的筛选[J].&中国预防兽医学报，)：193-197[5]&Demidov&VV.&Rolling-circle&amplificationin&DNA&diagnostics:&thepower&of&simplicity&[J].&Expert&RevMol&Diagn,&):&542-548[6]&Antson&DO,&lsaksson&A,&LandegrenU,&et&&&&&a1.PCR-generated&padlockprobes&detect&single&nucleotide&variationin&genomic&DNA&[J].&Nucl&AcidRes.&):&58[7]王明俊等.兽医生物制品学［M］.&北京：中国农业出版社，1995[8]孙濯华.中国高新技术产业导报［J］，1997,6[9]姜源等.医学生物技术［M］.北京：人民卫生出版社，1996[10]刘建忠，李宁，熊远等.生物技术通报，1997
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“品质”，与国内外生物试剂供应商保持密切的合作关系，专注于为生命科学和生物技术领域的客户提供优质的产品和技术服务，目前也成为众多知名品牌的代理，可以为客户在时间提供的产品和物流服务。胜创生物目前拥有8个品牌的总代理授权，29个品牌的一级代理授权；产品涵盖分子生物学、植物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物化学、生物制药与诊断试剂研发生产等领域。
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