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RNA干扰Fas基因表达的免疫组化半定量分析
□ 刘明社 赵中夫 张国英 张芸 武延隽
[1]长治医学院人体寄生虫学教研室,]长治医学院传染病学教研室,046000
摘　要:目的：探索图像分析技术在Fas蛋白表达检测中的作用。方法：用Image Pro Plus（IPP）软件图像半定量分析技术，判定RNA干扰抑制Fas基因后小鼠肝组织免疫组织化学染色切片和Western Blot检测的Fas蛋白表达情况。结果：RNA干扰有效抑制了Fas基因的表达，IPP图像分析方法显示，Fas蛋白表达在免疫组织化学染色切片的差异与Western Blot检测结果一致。结论：Image Pro Plus图像分析手段有利于通过半定量的方式判定Fas蛋白表达的变化。
作者单位：1 长治医学院人体寄生虫学教研室(046000)
2 长治医学院传染病学教研室 　基金项目
山西省自然基金资助项目()【摘要】&
　　目的：探索图像分析技术在fas蛋白表达检测中的作用。方法：用image pro plus（ipp）软件图像半定量分析技术，判定rna干扰抑制fas基因后小鼠肝组织免疫组织化学染色切片和western blot检测的fas蛋白表达情况。结果：rna干扰有效抑制了fas基因的表达，ipp图像分析方法显示，fas蛋白表达在免疫组织化学染色切片的差异与western blot检测结果一致。结论：image pro plus图像分析手段有利于通过半定量的方式判定fas蛋白表达的变化。
【关键词】& rna干扰 fas蛋白 免疫组织化学 图像分析
　　issue of effects of rnai inhibited fas expression via semi quantitative analysis of
&&& immunohistochemical image
&&& liu mingshe, zhao zhongfu，zhang guoying, et al.
&&& department of parasitology, changzhi medical college
&&& abstract& objective:it is surveyed the effect of image analysis in detecting expression of fas protein.methods：image pro plus（ipp） was used as the method of semi-quantitative image analysis on immunohistochemical slide image and on western blot specific protein strip image, and evaluating the expressing protein of fas gene inhibited by rnai. results:statistical analysis showed that expression of fas gene effectively inhibited by rnai.the result of semi quantitative image analysis on immunohistochemical slide image accorded with the result of on western blot specific protein strip image.conclusion：image pro plus is useful method in analyzing the immunohistochemical images of fas protein expression.
&&& key words& image analysis
　&& 在检测基因表达的研究中，用免疫组织化学染色方法表明特异蛋白表达的细胞定位和染色程度来表明表达量的多少。虽然从图像上看到了基因不同表达的差异，但要进行统计学处理，就应当把表达结果数字化。我们在进行rna干扰fas基因表达的研究中，运用image pro plus（ipp）软件分析了fas蛋白表达免疫组化的实验结果，并与western blot方法进行比较。探索用半定量方法分析研究基因差异性表达。
&&& 1& 材料和方法
&&& 1.1& rna干扰lps诱导的小鼠肝脏fas基因的表达实验［１］
&&& 1.2& 实验动物分组和fas基因表达检测
&&& 20只balb/c鼠随机分为rna干扰组（rnai组）、腺病毒通用阴性对照组（hk组）、模型组（m组）和正常对照组（n组）4个组，每组5只［１］。采用免疫组化方法检测肝脏组织fas和western blot方法检测各组实验组鼠肝脏组织fas蛋白的表达［１，２］。
&&& 1.3& 小鼠肝脏fas蛋白表达的免疫组化数码图像
&&& 实验鼠肝脏切片进行fas蛋白表达的免疫组化染色。在保持显微镜下相同光强度、数码相机关掉自动白平衡等功能、全部用手动设置等条件下，拍摄400&数码照片，每张切片拍摄5个视野的照片。20只鼠肝脏免疫组化数码图像共100幅。选择640&480像素范围进行裁切图像。
&&& 1.4& 小鼠肝脏fas蛋白表达的western blot检测结果数码图像
&&& 对显色后的pvdf膜进行数码拍摄（拍摄条件同上, 保持所有pvdf膜像素一致），每个实验组拍摄5幅图像，共20幅。
&&& 1.5& 数码图像的ipp软件分析
&&& 首先将ipp程序系统的灰度单位转换成光密度单位。免疫组化染色图像的分析，把图像中呈现黄色的区域（fas蛋白染色）作为aoi（area of interest）进行光密度测定分析。选择测量area面积、density（mean）平均光密度和iod（integrated optical density）累积光密度。western blot检测数码图像，以fas和&-actin蛋白表达条带作为aoi进行iod测定。
&&& 1.6& 统计分析
&&& 用spss软件对fas蛋白表达的iod值进行方差分析和lsd检验。 western blot结果的分析，根据fas蛋白表达的iod与&-actin蛋白表达的iod比值作为相对量进行统计学处理。
&&& 2& 结果
&&& 2.1& 小鼠肝脏fas蛋白表达的免疫组化检测ipp图像分析结果
&&& 各组实验鼠肝组织切片fas表达免疫组化染色结果（见图1，表1）。图中照片示每组各一只鼠免疫组化数码图像之一。表1& ipp图像分析鼠肝组织fas蛋白表达的免疫组化染色的iod值免疫组化染色切片数码图像iod值的统计分析显示，不同实验组间fas蛋白表达差异具有显著性（anova：f=557.48,p＜0.01）。m组与hk组之间fas表达差异没有显著性（t=0.114,p=0.909），而m组和hk组与rnai组之间fas表达差异具有显著性（t=28.907和t=29.021，p＜0.01）。
&&& 2.2& 小鼠肝脏fas蛋白表达的western blot检测ipp图像分析结果
&&& 刘明社等.rna干扰fas基因表达的免疫组化半定量分析各组实验鼠肝组织fas表达经western blot方法检测（见图2，表2）。表2& ipp图像分析鼠肝组织western blot检测fas与&-actin蛋白表达的iod比值 统计分析表明，不同处理组间fas表达差异具有显著性（anova：f=458.046,p＜0.01）。m组与hk组之间fas表达差异没有显著性（t=0.820,p=0.4282），而m组和hk组与rnai组之间fas表达差异具有显著性（t=26.767和t=25.947，p＜0.01）。
&&& 3& 讨论
&&& rna干扰方法作为基因敲除工具有效抑制基因表达，已经成为基因工程技术的重要手段，甚至可以作为疾病治疗的药物达到应用［３～5］。我们运用腺病毒载体把fas-shrna导入balb/c鼠体内，有效抑制了内毒素lps诱导的肝细胞fas基因的过度表达。经过ipp图像处理技术，对fas基因表达的免疫组化检测和western blot检测结果进行分析，结果均表明fas蛋白表达在rna干扰组和未干扰组之间存在统计学的显著差异性。
&&& ipp软件用于免疫组化结果的半定量分析方法在病理学诊断中有广泛的应用价值［6～8］，非常方便于图像资料的统计学分析。对western blot检测结果的分析也与免疫组化染色图像的分析一致，表明ipp的分析结果具有可靠运用价值。当然，正确的使用ipp软件还需要注意其对分析对象的适用性，条件设置不当，就会造成分析结果错误，如必须有一致的数码图像采集条件、一致的实验条件，以保证图像的来源前提条件相同，这样在后续的分析中才不会出现错误的结论。ipp软件的运用于分子生物学领域的研究，为图形图像的数字化分析带来极大的帮助。
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金月芽期刊网 2018与免疫组化相关的文献报道
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百科词条： （最后修订于 22:36:04）[共2315字]摘要：免疫组化的概念是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。免疫组化的分类免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。免疫组化实验所用的组织和细胞标本实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。免疫组化实验所用的抗体免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物......&&&
相关文献：【摘要】目的研究CEA免疫组化染色在检测肿瘤系膜微转移及环周切缘(CRM)侵犯方面的价值。方法选取经纤维结肠镜及病理证实为直肠癌病人40例，应用大组织切片技术对术后标本处理，分别行常规染色及CEA免疫组化染色，比较分析两种染色方法在检测肿瘤系膜微转移及CRM侵犯方面的价值。结果CEA染色检测肿瘤浸润程度大于常规病理染色，差异有显著性（t=5.23，P<0.001）；常规病理染色CRM阳性6例，CE【关键词】免疫组化；质量；染色免疫组化可以辅助病理诊断、指导治疗、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要［1］。随着免疫组化试剂新种类不断出现及方法的改进，特别是即用型试剂盒的出现，使抗体的标记更加简便、快捷，更加规范化。免疫组化标准化染色技术是一项实验性很强的技术，任何一个环节出现问题，都可以直接影响免疫组化结果［2］。因此，本文就免疫组化标准化染色质量的应注意的问题报告如下。1关键词免疫组化技术；组织切片；抗体；抗原修复免疫组化可以辅助病理诊断、指导治疗、评估预后，所以在做免疫组化过程中的质控问题处理尤其重要［1］。免疫组化技术是利用已知的特异性抗体或抗原特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂通过借助显微镜的观察，从而在抗原抗体结合部位确定组织细胞结构的一门组化技术。在病理诊断、基础医学研究工作中免疫组化技术已成为非常重要的手段。随着免疫组化及定性。方法12例21周至40周的女性胎儿尿道，分别进行石蜡包埋、胆碱乙酰基转移酶(cholineacetylcatransferase,CHAT)及神经肽Y(neuropeptideY,NPY)免疫组化染色，并对其结果进行半定量和定量分析。结果从尿道内口至外口，神经肽Y阳性区域显色范围逐渐变小、强度减弱，胆碱乙酰基转移酶阳性区域主要位于尿道中三分之一，统计学上具有显著性差异。结论尿道括约肌的胆碱【关键词】胸腔积液;冰冻切片;免疫组化胸腔积液是多种胸部疾病，特别是肿瘤性疾病的常见伴发体征，甚至为患者首发表现，明确胸腔积液的性质对于疾病的诊断、治疗有重要意义。一般病理检查通常离心、涂片、HE染色，但由于细胞分散、染色效果不好、重复性差等原因，诊断的阳性率低，易漏诊。尤其是增生的间皮细胞和转移性腺癌;未分化癌与小细胞癌和淋巴瘤之间不易区别，疑诊病例较多，对临床帮助不大。我们将胸腔积液离心后进行【摘要】目的探讨食管小细胞癌的临床病理特征及组织起源。方法收集食管小细胞癌9例，分析临床病理资料，进行光镜观察及免疫组化ABC法标记7种抗体。结果患者以中老年多见，肿瘤位于中下段，镜下形态分为燕麦细胞型、非燕麦细胞样型和混合细胞型小细胞癌，免疫组化染色CK、EMA均阳性，Syn、CgA5例阳性。结论食管小细胞癌是一种高度恶性肿瘤，组织发生可能来自全能干细胞。　　关键词食管肿瘤小细胞癌临床病理　　C【摘要】目的探讨子宫内膜小细胞癌伴内膜样腺癌的临床病理特点及预后。方法对子宫内膜小细胞癌伴内膜样腺癌的组织学和免疫组化及临床病理特点结合文献进行分析。结果原发性子宫内膜小细胞癌伴发内膜样腺癌非常罕见，瘤细胞小，呈巢状、索状或团状排列，易与子宫内膜间质肉瘤、恶性中胚叶混合瘤、恶性淋巴瘤混淆，免疫组化显示小细胞突触素、嗜铬粒素A、神经特异性烯醇化酶均呈阳性表达。结论子宫内膜小细胞癌伴内膜样腺癌恶性度高【摘要】目的探讨促纤维增生性小圆细胞肿瘤的临床病理特征及肿瘤与周围增生的纤维组织的关系。方法对11例促纤维增生性小圆细胞肿瘤进行HE光镜观察和免疫组化染色分析。结果肿瘤由巢团状小圆细胞组成，间质为分化程度不同的宽大的纤维结缔组织，与瘤组织界限清楚且无明显炎细胞浸润，免疫组化显示多向分化。结论促纤维增生性小圆细胞肿瘤的纤维结缔组织可能不属于反应性增生而属于肿瘤性增生，有待进一步做克隆分析研究证实。【近几年来，随着病理技术的不断更新换代，常规HE染色不能满足作为肿瘤医院及教学医院病理科的需要。每天，大量的外检标本及相关科室研究生课题的实验工作，免疫组化作为常规已为大势所趋，免疫组化自动染色仪的应运而生，也更显得顺理成章。　　免疫组化自动染色仪作为先进的病理仪器，带给我们的不只是简单的省时省力，更多的是因为不掺杂人为因素而带给我们的更准确更科学的实验结果。　　由WindowsXP操作系统支持的【摘要】目的探讨促纤维增生性小圆细胞肿瘤的细胞起源及其病理诊断和鉴别诊断。方法采用HE染色及免疫组化法观察分析。结果肿瘤组织由巢团状小圆细胞组成，间质为丰富的幼稚的梭形纤维组织，免疫组化显示上皮、间叶及神经内分泌阳性表达。结论促纤维增生性小圆细胞肿瘤是一种特殊的小圆细胞肿瘤，有其特殊的临床病理特点，结合光镜、免疫组化、电镜及基因分析可能起源于原始多潜能细胞。【关键词】促纤维增生性小圆细胞肿瘤；肺；关键词肝炎病毒，庚型；肝脏疾病；肝组织；免疫组化检测自1995年发现庚型肝炎病毒（HGV）以来，国内外学者对其分子生物学，流行病学的研究取得了一定的进展［1］。庚型肝炎病毒单克隆抗体制备成功，对于了解肝病患者肝组织中HGV的感染状况提供了依据［2］。我们从1998年3月—1999年5月对我科收治的62例急慢性肝病患者活体肝组织进行了HGAg检测，现将检测结果报告如下。　　1资料与方法　　1.1一般胃肠道间质瘤36例临床病理及免疫组化研究(pdf)胃肠道间质瘤（gastrointestinalstromaltumors，GISTs）是近年来随着组织化学、免疫组织化学、电镜以及分子生物学技术的发展与应用而提出的新的病理学概念，其免疫组化和超微结构不同于平滑肌瘤及神经鞘瘤。为准确认识GISTs，在日常工作中掌握GISTs的诊断及鉴别诊断，笔者对36例GISTs进行分析，探讨其临床病理及免疫组织化【摘要】目的研究雌激素的核受体ER?α和ER?β以及催产素、加压素在成年雌性小鼠下丘脑室旁核内的表达。方法采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法检测ER?α、ER?β、催产素和加压素在室旁核内的表达。结果雌激素的两种核受体在室旁核内都有表达，但是以ER?β为主（P＜0.001），其免疫阳性产物均在细胞核内，未见核外免疫阳性反应。催产素的免疫阳性产物主要在细胞核周围的胞浆即核周质内，而加压素的免疫阳性【摘要】目的探讨颅内横纹肌样瘤（rhabdomyosarcoma）临床病理及免疫组化研究。方法通过临床、病理组织学及免疫组织化学等确诊为颅内横纹肌样瘤，并与间变性胶质细胞瘤、大细胞髓母细胞瘤、恶性横纹肌样脑膜瘤相鉴别。在复习文献和临床资料的基础上，对该病例手术标本进行病理组织学观察和免疫组织化学染色。结果在病理形态上，瘤细胞大、呈多边形，胞浆嗜酸性核偏位、深染，似印戒细胞，部分细胞为泡状核，有核周【摘要】　　目的：观察54例胃肠道间质瘤（GIST）的病理诊断标准、良恶性指标和免疫组化标记特点，探讨理想的诊断GIST的免疫组化标记组合。方法：采用免疫组化SP法对肿瘤中CD117、CD34、SMA、S-100、VEGF等的表达进行检测。结果：1.54例GIST中，CD117、CD34、VEGF的阳性率分别为96%、88%、77%。2.CD117、CD34表达阳性率间无显著性差异（P<0.05）【摘要】免疫组化在我国各医院已广泛开展，但多以说明书为基础操作规程，多厂家操作不一，抗体效价滴度不尽相同，技术水平参差不齐，开展项目多寡不一，判断标准各持一词，室内质控更是开展甚少，造成个别病理大夫对免疫组化结果批判地接受。介于目前情况，免疫组化室间质控及室间调查势在必行。室间质控及室间调查的基础是室内质控，要想获得良好地真实地结果，把好操作关，才能保证免疫组化真正起到提示、验证病理结果及指导临床复习2003年11月-例血清甲胎蛋白（AFP）升高的住院患者病历资料，对其中诊断为胃癌患者的病理标本进行苏木精-伊红（HE）染色及AFP、癌胚抗原（CEA）、肝细胞抗原（HPC）免疫组化染色。总结有关资料并复习相关文献。结果血清AFP高于正常水平的8例胃癌中，2例确诊为胃肝样腺癌：AFP、CEA免疫组化均呈阳性；而HPS免疫组化呈阴性。2例患者确诊时均有局部或远处的肿瘤转移，姑息【摘要】目的选择能显示最佳的ER、PR染色效果高温抗原修复法。方法分别采用微波抗原修复和微波高压抗原修复两种抗原修复法对100例乳腺癌切片抗原修复，比较二者对ER、PR免疫组化检测效果的影响。结果经微波高压抗原修复，乳腺癌ER、PR染色阳性者分别为54%、49%，显著高于经微波抗原修复的染色效果42%、39%，且不易脱片。结论乳腺癌ER、PR免疫组化染色采用微波高压抗原修复后，染色阳性率明显优于经【摘要】目的研究大肠癌p53蛋白免疫组化表达与核仁组成区嗜银蛋白染色（AgNOR）计数的关联性。方法应用免疫组化和银染计数对80例大肠癌细胞中的p53蛋白、核仁组成区嗜银蛋白进行测定。结果大肠癌、腺瘤和正常粘膜细胞内的p53蛋白表达阳性率分别为76.7%、16.7%、5.0%，AgNOR颗粒计数分别为9.30±3.53，5.40±1.95，4.38±1.28。大肠腺癌细胞内的p53蛋白表达阳性率和鼻咽泡状核细胞癌过去曾称为淋巴上皮癌或大圆细胞癌，多将其归入未分化癌或低分化鳞癌。由于此型鼻咽癌有其特有的组织学特点且对放疗敏感，临床预后较好，我国学者主张将其单独列为一组织类型。有关鼻咽泡状核细胞癌超微结构及免疫组化的专题研究，国内未见报道，国外文献亦很少见。本文目的在于观察性肿瘤的超微结构及免疫组化特点，探讨其病因学、组织起源与分型等问题。　　1材料与方法1.1一般资料搜集我科1987年来积累【摘要】目的探讨卵巢原发性弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理特征及诊断、鉴别诊断要点。方法对1例卵巢原发性弥漫性大B细胞淋巴瘤进行临床病理分析及免疫组化研究，并复习相关文献。结果左侧卵巢完全被肿块取代，且对侧卵巢亦有侵及，大小7.0cm×5.0cm×4.5cm，呈实性、质细腻；镜下肿瘤组织具有相对一致的弥漫性大细胞组成，间以少量硬化性间质，肿瘤细胞表达LCA、CD20、CD79a、Vim，不表达CD4【摘要】目的观察卵黄囊癌的临床病理特点及甲胎蛋白（AFP）在该肿瘤中的定位特点。方法对29例卵黄囊癌进行了回顾性分析及ABC法免疫组化观察。结果癌组织均由圆形、柱形或鞋钉状细胞构成实体状、迷路状、乳头状或血管周围套状结构。部分病例可见微囊状或腺泡状结构;ATP棕黄色阳性表达颗粒是位于癌细胞之胞浆内，阳性表达强度与肿瘤细胞的排列结构视蜡块保留时间长短有一定差异。结论AFP作为卵黄囊癌的肿瘤标记物，有【摘要】目的探讨胃贲门癌的相关免疫组化研究，了解其临床病理及免疫表型特点。方法抽样对120例胃贲门癌进行相关免疫组化研究。结果发现只有c-erbB-2和CK17在单纯贲门癌与贲门－胃体癌之间表达的阳性率差异有显著性（P＜0.01）。结论虽然同为胃癌，但单纯贲门癌在组织来源及预后等方面可能不同，是一种特殊的癌种。【关键词】胃癌；免疫组织化学Immunohistochemicalstudyon120c【摘要】　　目的探讨孤立性纤维性肿瘤的临床病理特征、诊断和生物学特性。方法对孤立性纤维性肿瘤2例进行病理组织学和免疫组化观察，并复习相关文献。结果孤立性纤维性肿瘤有其独特的病理组织学结构特点，同一病例不同区域之间差别很大，肿瘤主要由呈无结构性增生的短梭形或卵圆形细胞组成，形成交替分布的半富细胞区和疏松细胞区，可见血管外皮瘤样结构，肿瘤细胞间血管丰富，管壁胶原纤维化。免疫组化显示CD34（+）、CD【摘要】目的研究nm23-H1基因在大肠癌发生、发展过程中的作用，并探讨其与大肠癌转移的关系。方法采用免疫组化、计算机图像分析等技术，观察人正常大肠粘膜、大肠腺瘤、无淋巴结转移的大肠癌、有淋巴结转移的大肠癌、淋巴结转移灶中nm23-H1蛋白表达和定位特点。结果nm23-H1基因在大肠癌癌变过程中，其蛋白的表达差异未见显著性（P0.05）;nm23-H1蛋白表达与大肠癌是否有淋巴结转移，差异有显著性只为Ⅰ组，注入奥美定10ml/kg的11只为Ⅱ组，未注入任何材料的3只为对照组，在相同的饲养条件下，分别于注入3、6、14个月时处死白色家兔，即刻切取标本切片，经10%甲醛固定后，石蜡包埋，HE及免疫组化染色观察。结果24只新西兰白色家兔中有6只兔(注入奥美定的4只，对照组的2只)，分别观察到支气管肺炎、支气管黏膜鳞状上皮化生、肝点状坏死、间质性心肌炎等病理改变；其余18只兔均无明显改变。免疫组化日中华皮肤科杂志2006Vol.39No.10P.577-5809（沈阳）为了探讨免疫表型对蕈样肉芽肿与扁平苔藓、银屑病鉴别诊断的意义。研究者应用ABC免疫组化技术检测15例蕈样肉芽肿，17例银屑病和17例扁平苔藓，6例正常人皮肤的CD1a、CD4、CD8、ICAM-1、LFA-1、HLA-DR(树枝状细胞)、CD30和CD7的表达情况。结果蕈样肉芽肿表皮CD1a，CD30，【摘要】目的比较抗原修复对多聚甲醛固定脑组织冰冻切片免疫组化结果的影响。方法成年SD大鼠用4%多聚甲醛经心腔灌注、固定后，分别经15%及30%蔗糖梯度脱水后进行冰冻切片（10μm），取相同部位切片20张，用兔抗Ach-M2受体多克隆抗体和小鼠抗DA-D2受体多克隆抗体作S-P免疫组化染色。结果经抗原修复的冰冻切片组的阳性结果比未经抗原修复组有明显提高。结论本实验首次发现多聚甲醛固定的组织冰冻切片经日中华泌尿外科杂志2005Vol.26No.6P.375-37814（上海）为了探讨α-甲酰辅酶A消旋酶(AMACR，P504s)免疫组化染色在前列腺癌诊断中的价值。研究者前列腺癌(PCa)标本46例(A期1例，B期19例，C期14例，D期12例,Ⅰ级4例作者：免疫组化在疾病的诊断和鉴别诊断以及治疗中起着非常重要的作用，是病理诊断和某些疾病治疗方案选择的重要依据。某些特染又能很快帮助鉴别疾病的发展过程，病变程度［１］。怎样将这两种方法很好的结合起来是快速诊断疾病及时提供治疗方案的前提。我们在实践中摸索一种将特染与免疫组化结合在一起的方法现介绍给大家。1材料与方法1.1材料选自广东省中医院病理科20例冰冻及石蜡标本，网状纤维染色试剂，福州迈新公司一抗(EF及其同事评估了伴有晶状体异位的马凡综合征患者结膜原纤维蛋白-1的表达情况。制备6名伴有晶状体异位的马凡综合征患者和15名年龄匹配对照者的结膜冰冻切片，利用小鼠抗人原纤维蛋白-1抗体通过卵白素-生物素免疫过氧化物酶技术进行染色。通过光学显微镜观察分析结膜内原纤维蛋白-1的染色特点。结果显示，所有取自对照者的结膜标本新鲜冰冻切片均显示出原纤维蛋白-1染色的特征形式。研究人员观察到胶原束周围有细纤维形成日中华泌尿外科杂志2005Vol.26No.6P.375-37814（上海）为了探讨α-甲酰辅酶A消旋酶(AMACR，P504s)免疫组化染色在前列腺癌诊断中的价值。研究者前列腺癌(PCa)标本46例(A期1例，B期19例，C期14例，D期12例,Ⅰ级4例，Ⅱ级14例，Ⅲ级28例)，良性前列腺增生(BPH)53例，前列腺上皮内瘤(PIN)13例，正常前列腺9例，前列腺炎6例，膀R组的bFGF和CD68阳性率不同。结论外伤性PVR也是一种细胞增殖性疾病，玻璃体内细胞增殖与生长因子水平密切相关，是外伤性PVR形成与发展的重要机制之一。关键词增殖性玻璃体视网膜病变玻璃体切割物免疫组化　　Immunohistochemicalstudyonvitrectomyspecimensofproliferativevitreoretionpathy　　SunYongmei，FuGuan，经抗感染药物治疗后，良性肺病患者血清VEGF水平明显下降。结论资料提示肺癌发生和发展过程中VEGF呈过度表达，检测患者血清VEGF可以作为肺癌诊断和预后的有用指标。　　关键词血管内皮生长因子肺癌免疫组化酶联免疫吸附分析诊断　　Abnormalexpressionofvascularendothelialgrowthfactorand　　itsdiagnosisandprognosisvalues口腔医学2005年第3期11（济南）为了探讨Runt相关基因2/核心结合因子a1(Runx2/Cbfa1)在小鼠牙周组织发育过程中的时空表达及意义。研究者建立BALB/c小鼠牙周发育动物模型，采用免疫组化方法检测Runx2/Cbfa1在小鼠出生后各期牙周组织发育中的表达及特点。结果Runx2/Cbfa1在牙齿发育过程中的表达具有时空特异性，在牙根开始发育之前，仅在牙槽骨及成骨细胞中表达；当牙根开始别，淋巴管瘤有大小不等的囊状管腔，内衬扁平细胞，本瘤除淋巴管样管腔外，还可以见到条索状或腺管状结构，细胞除扁平外，还可以有立方状；（2）与转移性腺癌鉴别，腺管样结构无细胞异型性，无病理性核分裂相，免疫组化肿瘤细胞ck、vimentin呈弥漫性阳性表达，EMA、CEA、S-100均为阴性，对明确诊断有重要意义；（3）与子宫上皮样平滑肌瘤鉴别，子宫上皮样平滑肌瘤，呈条索状排列，无分支状间隙结构；（4）良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音”染色片（有日中华口腔医学杂志2005Vol.40No.1P.62-6610（武汉）为了分析31例口腔畸胎样囊肿的临床病理及免疫组化特点，研究者复习武汉大学口腔医学院年病理档案资料及切片，31例符合Meyer的口腔畸胎样囊肿诊断标准。全部病例行组织学、组织化学和角蛋白免疫组织化学研究。结果本组病例约占同期颌面部软组织囊肿的1.85%.31例中，儿童为27例，其中24例为先右耳仅向中耳注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为实验对照。术后3、7、14、30d采集中耳粘膜标本，SP法检测中耳粘膜中TNF-α及ICAM-1的表达并计算机图像定量分析处理，HE染色检查中耳粘膜的病理变化。结果发现4个时点组左侧中耳粘膜上皮细胞和血管内皮细胞中TNF-α及ICAM-1的表达均较对照组明显增强。14d组和30d组TNF-α及ICAM-1的阳性表达范围扩大，在炎性细胞及成纤维细胞也有大量【摘要】目的探讨新类型食管癌-食管基底细胞样鳞癌（BSC）的临床病理学特征。方法收集21例食管BSC和30例食管鳞癌标本，分别作HE、组织化学及免疫组化染色（S-P法），其中7例BSC及10例鳞癌作电镜观察，并进行了随访。结果BSC最主要的组织学特征是基底细胞样癌细胞呈实体小叶状、筛网状排列，癌巢中央见粉刺状坏死，并恒伴有鳞癌或癌巢内伴有小灶性鳞状成分，表面粘膜可伴有异型增生或原位癌。而食管鳞癌常n，室温冷却10～30min，PBS洗;（4）滴加2%正常羊血清，室温20min。去多余液体，不洗;（5）滴加鼠抗人雌、孕激素受体单克隆抗体，37℃1～2h或4℃冰箱过夜，PBS洗;（6）滴加生物素化的抗鼠抗体，37℃30min，PBS洗;（7）滴加辣根过氧化酶标记链霉亲和素37℃30min，PBS洗;（8）DAB显色，苏木素淡染核，脱水，透明，封片。1.3判断标准以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性免疫组织化学（Immunohisochemistry）检测技术曾被公认为病理学发展史上的第二个里程碑，此项技术发展到今天，大大充实了病理学的内容，使病理诊断结果更精确，将病理学提高到了形态和功能相结合的水平。免疫组织化学方法的敏感性和特异性直接影响诊断结果的准确性。近两年来，在本科同志的配合下，笔者已做免疫组化420例，取得了很好的效果，并且明显的提高了诊断结果的准确性，支持了对临床病人的治疗。现形态学特点为肝细胞气球样变、炎症、细胞骨架改变、酒精小体（MB）形成，最终大多发生小结节性肝硬化。但目前仍未阐明铜中毒时出现MB的机制。奥地利格拉茨大学医学院的HelmutDenk博士及其同事应用免疫组化方法对不同类型铜中毒时的MB进行了分析。结果显示，角蛋白、p62、泛素是必要的成分。因此，同酒精性脂肪肝（ASH）和非酒精性脂肪肝（NASH）一样，MB与铜中毒相关。p62是一种多功能早期快反应基，是指冠状动脉粥样硬化使血管阻塞导致心肌缺氧而引起的心脏病，其确定的发病机理尚未完全明了。近年来，随着人们对自身免疫产生的病理生理现象的深入了解，发现有些自身抗体与缺血性心脏病的发生发展密切相关，特别是抗心磷脂抗体（ACA）在缺血性心脏病的发生发展中起一定的作用。本研究旨在通过免疫组化法检测心肌梗死患者心肌细胞内自身抗体的存在。1材料与方法1.1取材治疗后最终死亡的10例心肌梗死患者在经患者家属慢性ITP时脾脏的形态学及免疫组化研究(pdf)【摘要】目的研究ITP时脾脏的病理形态及免疫组化特点。方法应用光镜观察36例ITP脾脏的形态特征；用免疫组化S-P法检测CD3、CD4、CD8、CD20、CD41、CD43、CD45Ro、CD68、P53和PCNA在ITP脾脏组织中的表达情况。结果本组男女之比为0.19:1，男性平均年龄24.5岁，女性平均年龄32.6岁。脾脏呈轻度肿大。主要组织学改5/9），男性明显多于女性；肺大细胞癌占肺癌切除病例的1.28%；平均存活时间为23个月，P53蛋白过度表达，阳性率为65%(13/20)，介于鳞癌、腺癌与小细胞癌之间，增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色阳性率为100%（20/20）。结论　肺大细胞癌作为一种病理类型，已不利于临床的诊断及治疗，建议将肺大细胞癌分成鳞分化型、腺分化型、神经内分泌型、未分化型。　　Analysisofthecli约为5~30分钟；胃蛋白酶消化37℃时间为30分钟。适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。　　3、免疫组织化学染色　　SP法　　1）脱蜡、水化；　　2）PBS洗2～3次各5分钟；　　3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；　　4）PBS洗2～3次各5分钟；　　5）抗原修复；　CPBS:10×贮存液，1×工作液，（0.1M、0.5M、2MPBS均相应配制;DS-P封固液。E0.01M枸橼酸缓冲液;FPoly-L-LG蓝色DAB显色试剂盒（4℃保存）。HS-P免疫组化染色试剂盒（4℃保存，免冻）。（2）仪器:①BTS-20-M彩色图像显微分析系统，英国。②828型（台、手执式）PH/ISE测试仪，美国奥立成（orion）公司。③DZF-6050真空干燥箱，上海S洗2次每次3分钟。4.每张切片加一滴或50ul3％过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。TBS冲洗3次，每次3min。5.除去TBS液，加一滴或50ul一抗（灭活PLB免疫小鼠所得到的多抗，1：3000稀释），阴性对照采用普通血清，室温下孵育2小时，或4℃过夜。6.TBS洗3次，每次5min，除去TBS液，每张切片加一滴或50ulpolymerenhancer（试剂A细胞癌变的分子生物学基础。随着肿瘤分子生物学的进展，对癌基因和增殖细胞核抗原（PCNA）在癌组织中表达的研究也日趋深入。本文应用p53单克隆抗体DO-1和PCNA单克隆抗体PC10对90例肺癌进行免疫组化标记，观察其表达特点并探讨其意义。1材料与方法1.1材料来源90例肺癌标本均取自我院胸外科近年来手术切除的病例。所有标本取材后用10%甲醛固定，石蜡包埋。每例蜡块连续切片3张，厚度5μm。HE染色目的评估采用ELISA法检测抗VCA—IgA和抗EA—IgG在鼻咽癌血清学诊断中的价值。方法收集80例鼻咽癌患者和80例健康成年人的血清，用ELISA检测抗VCA—IgA和抗EA—IgG，用免疫组化法检测抗VCA—IgA和抗EA-IgA，比较2种检测方法的结果。结果2种方法检测抗VCA—IgA的敏感性均为96％（77／80）。ELISA检测抗EA—IgG的敏感性为89％（71／80）。ELISA联
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