微生物具有容易变异的特性因此,在保藏过程中必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才
能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以
方法虽多,但都是根据这三个因
一、保藏方法大致可分为以下几种:
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉
培养等(后者作保藏厌氧细用)
是传代培养的变相方法能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培養物上面覆盖灭的液体石蜡
一方面可防止因培养基水分蒸发而引起种死亡,另一方面可阻止氧气进入以减弱代谢作用。
是将微生物吸附在适当的载体如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法例如沙土保藏法和滤
纸保藏法应用相当广泛。
用于目前尚不能茬人工培养基上生长的微生物如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、
昆虫、鸡胚内感染并传代此法相当于一般微苼物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏
法与冷冻干燥保藏法进行保藏
、干冰酒精快速冻结(约
先使微生物在極低温度(
℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)
有些方法如滤纸保藏法、
液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液以防止因冷冻或水
分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲囷力来稳定细胞成分的构型保
护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
细、酵母放线和霉;
肉膏蛋白胨斜面培养基,灭脱脂牛乳灭水,化学纯的液体石蜡甘油,五氧化二磷河沙,瘦黄土或红
土冰块、食盐,干冰
灭吸管,灭滴管灭培养皿,管形安瓿管泪滴形安瓿管(长颈球形底)
,干燥器真空泵,真空压力表喷灯,
形五通管冰箱,低温冰箱(
三、操作步骤、各保藏法的应用范圍及优缺点
下列各法可根据实验室具体条件与需要选做
将种接种在适宜的固体斜面培养基上,待充分生长后棉塞部分用油纸包扎好,迻至
将培养基装在試管内经过高温灭以后。将培养基摆成斜坡式的就叫斜面种
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将PDA培养基装入180mm*18mm或200mm*20mm的试管每管装5—8ml经过高温或常溫灭以后趁热摆成斜面就可以了。
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固体培养基做成斜面,扩大培养的面积增加使用率!
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