核酸检测到底是检测DNA还是RNA？还是同时检测？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2022-06-16 09:17 标签： dna和rna的磷酸相同吗

新冠核酸检测试题及答案

1.临床实验室若对检测系统进行性能核实,需要进行以下哪组实验(单项该题正确答案:

2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案:

3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案:

D.小潮气量和低吸气压力

4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案:

5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子

6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案

7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案

A套管“或“伞型罩“连接

8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案

9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D 以上均不是

10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案:

B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100%

11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项)

关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案

13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案:

A《病原微生物实验室生物安全管理条例》

14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案

15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案

16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是

17.下列关于Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案

E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键

18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案

D孔位不足时,可将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解,加热时间不变。

9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案:

A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩

20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案

E.进行核酸提取的有效性评价

21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项)

核酸检测基本知识 什么是核酸检测 核酸的定义：核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′， 5′ - 磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。 核酸具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。 核酸的分类 核酸大分子可分为两类：脱氧核糖核酸（ DNA）和核糖 核酸（ RNA）。 核酸的组成 DNA和 RNA都是由一个一个核苷酸 (nucleotide) 头尾相 连而形成的，由 C、H、 O、 N、P， 5种元素组成。 DNA是绝大 多数生物的遗传物质， RNA是少数不含 DNA的病毒（如 HIV病毒，流感病毒， SARS病毒等）的遗传物质。 RNA平均长度大约为 2000个核苷酸，而人的 DNA却是很长的，约有 3X10^9个核苷酸。 核酸的功能 在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的 作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物 合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列 重大生命现象中起决定性的作用。 DNA与 RNA都是核酸，它们在化学组成上有什么区别如 下： DNA与RNA的比较 DNA RNA 主要存在部位 细胞核 细胞质 基本组成单位 脱氧核苷酸 核糖核苷酸 碱基种类 A、 G、 C、 T A、G、 C、 U 五碳糖种类 脱氧核糖 核糖 核苷酸链 两条脱氧核苷酸链 一条核糖核苷酸链 检测方法 核酸检测方法，主要通过同时进行靶核酸扩增和可检 测信号的生成来检测样品中的靶核酸。可应用于临床微生 物学、血液筛选、遗传病诊断和预防、法医学等领域的核 酸检测。 目前主要使用的方法有以下几种： 核酸序列依赖性扩增法 NASBA是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性 核苷酸序列等温扩增 RNA的新技术。反应在 42℃进行 , 可在 2h内将 RNA模板扩增约 109倍。 NASBA原理是提取病毒 RNA,加 入 AMV逆转录酶、 RNA酶 H、 T7RNA聚合酶和引物进行扩增。 整个反应分非循环相和循环相 : 在非循环相中 , 引物 I 与模板 RNA退火后在 AMV逆转录酶的作用下合成 cDNA,形成 RNA:DNA 杂合体 , 随即 RNaseH降解 RNA,引物Ⅱ与 cDNA退火 , 在反转录酶作用下合成第 2条 DNA互补链。双链 DNA可在 T7RNA聚合酶 的作用下 , 经其启动子序列起动而转录 RNA， RNA又可在反转录酶的作用下反转录成 DNA，进入循环相 , 对模板进行大量扩增。 转录介导的扩增技术 TMA技术原理与 NASBA基本一致，略有不同之处是 TMA利用的是 MMLV逆转录酶及 T7RNA聚合酶两种酶， MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有 RNA酶 H活性。反应在 41.5 ℃进行 , 可在 1h内将 RNA模板扩增约 109倍。 c. 连接酶酶促链式反应 (LCR) LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种 探针扩增技术，是继 PCR后新发展的一种较有前景的体外扩 增技术。它的原理就是由 2段寡核苷酸单链 DNA探针与目标 序列杂交 , 当该 2段 DNA探针与没有发生突变的模板褪火后 , 如果 2探针是紧邻的 , 中间没有核苷酸间隔 , 则可在连接酶作 用下连接起来 , 连接以后的新链又可以作为模板 , 引导下一 周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核苷酸的碱基 突变 , 则连接反应不能发生 , 扩增反应终止。 d. 多聚酶链反应检测法 (PCR) PCR技术的基本原理类似于 DNA的天然复制过程，其特 异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成。 ①模板 DNA的变性：模板 DNA经加热至 93℃左右一定时间后，使模板 DNA双链或经 PCR扩增形成的双链 DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。 ②模板 DNA与引物的退火 ( 复性 ) ：模板 DNA经加热变性成单链后，温度降至 55℃左右，引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合。 ③引物的延伸： DNA模板—引物结合物在 TaqDNA聚合酶的作用下，以 dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配 对与半保留复制原理，合成 1条新的与模板 DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性—退火—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次 循环的模板。每完成 1个循环需 2～ 4min ，2～ 3h就能将待扩 目的基因扩增放大几百万倍。检测 HIV RNA,需要先利用逆 转录反应将 RNA转录为 cDNA，继而以 cDNA为模板进行 PCR扩 增即可，这样的反应称为 RT-PCR。 e. 实时荧光定量 PCR技术 实时荧光定量 PCR技术 , 是指在 PCR反应体系中加入荧光

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