简介/蔗糖密度梯度离心
蔗糖密度梯度离心
蔗糖密度梯度离心，将禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）Ｌ2Ｚ株、Ｖan Ｒoekel株和1143株分别经接种6日龄ＳＰＦ，接毒后，以4500r/min离心及胰腺，用玻璃匀浆器制成10％的组织悬液。组织悬液经3次反复冻融后，以4500r/min离心15min，取上清液。而后用氯仿处理，取水相，经冷冻真空浓缩，进行不连续蔗糖密度梯度离心。取出含ＡＥＶ的组分，用ＰＢＳ稀后超速离心除去蔗糖。亦称平衡密度梯度离心法。用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度。若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力的位置，集聚形成大分子带状物。
利用这种现象，测定核酸或蛋白质等的浮游密度，或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。自1958年米西尔逊（M．Meselson），斯塔尔（F．W．Stahl），维诺格拉德（J．Vinograd）成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA以来，该法取得许多成果。为得到必要的梯度，多采用浓氯化铯溶液，所以有时也使用氯化铯浓度梯度离心法这个名称，还可采用、等溶液。通常利用分析超，但在将细胞颗粒成分进行分离等以纯化为目的的情况，利用密度差，使用分离超离心机，采用预先制备好的蔗糖等的密度梯度。〔2〕采用蔗糖等一些小分子溶液，预先在分离超离心机的样品地内制备出密度梯度，在其上面再加上一层少量的大分子溶液后，离心，大分子就形成层状而沉降。若含有沉降系数不同的许多，就会出现许多层。这种情况采用适当的编排号码，取出样品池内的溶液，然后进行。
应用方法/蔗糖密度梯度离心
蔗糖密度梯度离心
纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法，能得到比较纯的病毒。其过程如下：
1、将收集的组织或或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。
2、先以5000g15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
3、接着10万g超速离心2h，将沉淀用少量STE溶解。
4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液，然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带，用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。
5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的，然后11万g离心3h,用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起，即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用，用时可用分光光度计测定其病毒。
产品用途/蔗糖密度梯度离心
用蔗糖密度梯度离心法，进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化。将禽脑脊髓炎病毒(AEV)L2Z株、Van Roekel株和1143株分别经卵黄囊接种6日龄，接毒后13天，收集脑、消化道及胰腺，用匀浆器制成10%的组织悬液。组织悬液经3次反复冻融后，以4500r/min离心15min,取上清液。而后用氯仿处理,取水相，经冷冻真空浓缩,进行不连续蔗糖密度梯度离心。取出含AEV的组分，用PBS稀。后超速离心除去蔗糖,得到提纯的病毒，病毒样品经2%磷钨酸负染，于下观察可见典型的病毒粒子，大小为24---28nm。
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猜你想了解离心分析用蔗糖密度梯度简易制备法--《动物学研究》1980年04期
离心分析用蔗糖密度梯度简易制备法
【摘要】：正 在生化分析研究工作中,经常需要使用蔗糖密度梯度离心分析。制备蔗糖密度梯度的装置,在国外多已商品供应,如瑞典LKB公司出售的密度梯度分配器就是比较完善的工具。在国内尚无成品供应,由于在研究工作中需要使用蔗糖密度离心分析,就促使设计制作小型简易蔗糖密度梯度分配器,如附图1所示。 蔗糖密度梯度分配器分下列几个部分: ①蔗糖梯度母液玻璃容器:每组由两个直径相等的玻璃管组成,一组玻管内径为0.8cm,高8cm,可为5ml离心管制备蔗糖梯度溶液。另一组玻管内径为2.6cm,高9cm,可为30ml的离心管制备蔗糖梯度溶液,或可供70ml以下线性梯度溶液洗脱小型层析柱用。每组管子其中一只下部烧结上两个对称的小玻管开口,另一只仅烧结一个小玻管开口,两玻管之间用聚乙烯管相连,用螺旋夹夹住。
【作者单位】：
【正文快照】：
在生化分析研究工作中,经常需要使用蔗糖密度梯度离心分析。制备蔗糖密度梯度的装置,在国外多已商品供应,如瑞典LKB公司出售的密度梯度分配器就是比较完善的工具。在国内尚无成品供应,由于在研究工作中需要使用蔗糖密度离心分析,就促使设计制作小型简易蔗糖密度梯度分配器,如
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【参考文献】
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夏邦颖,郭郛;[J];Acta Biochimica et Biophysica S1979年02期
【共引文献】
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夏邦颖;[J];昆虫分类学报;1982年Z1期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
夏邦颖,郭郛;[J];昆虫学报;1978年02期
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【求助】关于蔗糖密度梯度离心，急！！！
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这个帖子发布于10年零303天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位战友好啊！我最近想用蔗糖密度梯度离心精提线粒体蛋白，但是铺了几次蔗糖密度梯度，刚开始还能看到清晰的分界，可是界线越来越模糊，没过半小时几乎看不到分界了。这样就别提加入样品超离后还能得到什么产物。我铺的时候很小心，尽量轻而不扰动下层液体。最后效果不很理想，特向有经验的战友求助，老板催的紧，心急啊我，实验卡在这儿了:(
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配好的蔗糖密度梯度不能放置时间太长,我们一般配好后,立即就用,加上样品后,离心10min,就可以了.你的梯度是多少呢?我们用的是1:2和1:4的.就是原液1份加2份PBS和4份PBS.样品不一样,梯度也不一样.
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谢谢fantian_dc战友的回复！：）我用的梯度是60％、32％、23％、15％蔗糖的EM缓冲液，h离心啊，最后期望得到酵母的线粒体蛋白。这些都是文献上提供的，不过我做这个梯度离心（界线模糊，但勉强离心了），效果都不理想啊（因为看不清分界，所以蛋白都不知跑到哪里去了），闷请问，有人有用超离管的经验吗，因为它要加上一个特别的金属塞，封口之后还要再往里面填满液体，以防管在高速离心运转时管变形破裂。这样就算做好梯度，但是封口过程难免摇动管子，这样蔗糖溶液就相互扩散的更快了：（有没有战友可以提供铺好蔗糖梯度的具体方法及需注意的细节啊？？？在这不胜感激先啊！:)
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kakeey 编辑于
没有人回应,焦急等待中……
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