案例分析马林巴琴

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-12-26 01:19 标签： 马林
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3秒自动关闭窗口　顽强的青霉菌――实验室里的英勇斗士
课题组成员：蒋舒、吴娟、秦晓春等
指导老师：戴胡爽
[资料一]我们周围的微生物
微生物大量滋生时，人们能看到它们的集合体或形成的菌落。在自然条件下，微生物忍耐力强，生活条件要求简单，繁殖能力极强。
[资料二]常用的灭菌方法
常用的灭菌方法可分为物理方法和化学方法两大类。物理方法如：干热（烘烤和灼烧）、湿热（蒸热和加压蒸煮）、射线处理（紫外线）、超声波处理等。化学方法如：使用灭菌剂――升汞、70%的酒精、抗菌素、福尔马林、碘伏等。这些方法和药剂应该根据材料、不同目的、不同实验阶段的不同要求而分别选择使用。
[资料三]细菌或霉菌对植物组织培养的危害
植物组织培养对无菌条件的要求是非常严格的，因为培养基含有非常丰富的营养，稍不小心就容易受到细菌或霉菌的污染。由于微生物繁殖极快，同时还分泌对植物组织有毒的代谢废物，最后能使植物组织死亡或失去使用价值。大面积的污染将使植物组织培养蒙受很大损失。如何控制污染是组培工作者不断探索的课题。
[资料四]我校的实验条件
我校拥有省内中学一流的植物组织培养实验室，可独立完成组织培养的过程。配有各种消毒杀菌设备和试剂，如：紫外灯、高压灭菌锅、酒精、升汞、碘伏等。
【提出问题】
我们进行组织培养实验时，常常在完成一系列繁杂的操作后，终于把组培苗放进光照培养室。几天后，却发现透明的培养基上长出了细菌菌落或毛茸茸的霉菌菌落。欠不甘心实验失败，开始思考“为什么”和如何才能彻底灭菌。同学们提出了许多看法，有的认为是紫外线杀菌时间不足，有的认为是高压灭菌锅灭菌不充分，有的认为是操作时自己的手段有消毒干净等。经过分析，我们确认，在配制培养基的过程中，培养基接触了空气，因此本身是带菌的。如果培养基在密封后仍未能彻底杀菌，在这种培养基上接种的小苗一定会被污染的，也就是说实验注定是失败的，因此培养基的灭菌是关键。当然接种台的消毒（用紫外线和70%的酒精），手的消毒（用70%的酒精）等也极为重要。通过阅读和询问，我们了解了培养基的灭菌，是利用高温（121℃）高压来杀死霉菌的孢子和细菌的芽孢。这些霉菌孢子和细菌芽孢的抗逆性很强，那么在高温高压锅的温度达到121℃时需多长时间才能彻底杀死霉菌呢？
请写出你提出的问题__________________________________________
你认为最有价值的问题是______________________________________
青霉在高温（121℃）高压锅中的存活率与高温时间长短有关。
你解决问题的假设是__________________________________________
[实验探究后形成方案]
1、认真学习高温高压灭菌的杀菌原理和操作规程（防止意外），设计实验程序。
2、采样、取青霉分别接种于空白培养基，培养成菌落。
3、将生长状况相似的培养基分成三组，分别放入高压锅在121℃下灭菌不同时间。
4、取出冷却，放入培养室，观察记录，分析结果。
你解决问题的方案是___________________________________________
[器材准备]
青霉、接种环、三角烧瓶、空白培养基（包括配制用的其他设备），高温高压灭菌锅、超净接种台及相关接种设备、光照培养室、70%酒精、手表。
你所准备的器材是_____________________________________________
[实际操作]
1、取一块腐烂霉变的桔子皮做接种源（可放在一密闭烧瓶人）。
2、配制250mlMS培养基，分装40瓶，灭菌待用。
3、在超净工作台上，用灭菌过的接种环（火烧冷却后）接触一下青霉，然后打开装有灭菌培养基的三角烧瓶，轻轻将接种环擦过培养基表面，勿使环扎入培养基内部。
4、将使用过的接种环用火烧后冷却待用；盖好接种完毕的培养瓶，放入光照培养室。
5、依上述方法，接种30瓶，全部移入光照培养室，温度25℃（留10瓶空白做为对照）
6、7天以后，根据青霉生长情况，把相似的青霉培养瓶组合在一起。共分成四组，每组10瓶，做好标记，分别为甲组（10分钟）、乙组（15分钟）、丙组（20分钟）和对照组。
7、分三次放入同一高温高压灭菌锅，按常规操作灭菌。当压力上升到1.06kg/cm2，锅内温度121℃时开始计时。
8、甲组在121℃下保持10分钟，乙组保持15分钟、丙组保持20分钟。
9、时间到后，缓慢放出蒸气。当压力降至零后，找开盖子，取出培养瓶，冷却后放入光照培养室（25℃）培养，然后定时观察各组青霉生长情况。
10、三天后开始记录。表格如下：
（月、日）
表霉仍生长的瓶数
你解决问题的主要步骤是_______________________________________
1、在实验中，我们给青霉培养瓶分组时，要充分考虑瓶内青霉生长情况的相似性，使组别之间的由其它因素引起的差异降到最低。
2、对各组别的培养瓶，我们采用同样的操作顺序，同样的培养条件，使青霉生长只受不同灭菌时间的影响，以保证实验结果的科学性。
3、同时，我们发现污染大规模出现是在接种后7天以内。这段时间青霉在适宜温度条件下，快速繁殖成可见的菌落，而7天以后，污染的上升速度就有限了。至于仍被污染的培养瓶（如对照组、丙组），我们推测可能是培养室内空气流动，导致个别孢子透过瓶盖缝隙落入培养基所致。光照培养室空气消毒不可忽视，特别是在梅雨季节。
【研究成果】
根据对实验结果的观察分析，丙组的灭菌效果最理想。但是所谓灭菌仍不是绝对的，少量的孢子仍未杀死，在适宜条件下又大量繁殖，可见孢子的抗逆性是很强的。
你的研究成果是_________________________________________________
【扩展与应用】
1、根据以上的实验方法比较实验，我们可以用来解决其他类似问题。如：黄曲霉、红色面包霉对高温的耐受性。
2、还可以研究青霉对酒精、升汞、碘伏等常用的灭菌剂和对紫外线的耐受性。
3、细菌的芽孢对实验室内各种杀菌措施的耐受性如何呢？值得探讨。
4、研究微生物的生命活动规律，把握其对不同环境的适应特点，不光对组培室的工作至关重要，对于其他行业，如：食品加工、医疗卫生都有极大的意义。
你的研究成果有何应用和扩展_______________________________________
【参考文献】
1、《微生物学教程》高等教育出版社
2、《微生物学实验》科文（香港）出版有限公司
出处：常州市田家炳实验中学 《研究性课程实验案例》(window.slotbydup=window.slotbydup || []).push({
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