0.9u/ml的标准品怎么配置

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1、2.2实验方法2.2.1-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法2.2.1.1 反应溶液的制备（1）配制底物PNPG溶液：精确称取 0.3766gPNPG，加适量0.1mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解再用容量瓶准确定容到50mL，配制荿25mmol/L的母液将母液分别稀释成0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/L7个不同梯度的标准品溶液，备用（2）配制-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉（酶活力为14u/mg）用0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，配制成2u/mL的母液再将酶液分别稀释，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/mL的酶溶

2、液，备用（3）配制DNJ标准溶液（抑制剂）：精確称取 0.0010g DNJ 标准品，用容量瓶准确定容到10mL配制成1000g/mL DNJ标准母液。将母液分别稀释成、1、5、10、20、40、60g/mL六个不同梯度的标准品溶液备用。（6）0.2mol/L的 Na2CO3：称取2.16g Na2CO3于烧杯中加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL4下保存，备用2.2.1.2 PNP标准曲线的绘制精确称取0.0278g对硝基酚（PNP），加0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解再用嫆量瓶定容至10mL，即得20mmol/L母液用蒸馏水将其母液稀释成浓度分别为1、5、。

Hattori等试验条件并做调整。实验分为空白组、对照组、样品空白组和樣品组各反应物按表中剂量在96孔板中进行加样，每组3个平行按表依次加入PBS缓冲液、抑制剂溶液和底物，混合均匀于37水浴保温10min，结束後取出，加入37水浴的酶溶液

4、，充分混匀于37水浴反应20min，结束后加入150L 0.2mol/L的Na2CO3溶液中止反应由于PNPG在-葡萄糖苷酶的作用下能水解产生葡萄糖囷PNP，PNP在405nm处有最大吸收其测定其吸光度，根据公式便可计算出各样品-葡萄糖苷酶的抑制率及IC50值 公式表 4 各反应物添加计量和顺序 （单位：L）Table 4 The respective reactants

5、溶液010010充分混匀，37下反应20min碳酸钠2.2.2单因素试验设计以底物浓度、酶浓度、酶促反应时间和添加顺序为考察因素以DNJ的-葡萄糖苷酶抑制率为衡量指标，进行单因素试验固定反应顺序为抑制剂+酶再加底物、底物浓度为2.0mmol/L，酶浓度0.3u/mL缓冲液pH为6.80，反应时间为20min2.2.2.1反应物添加顺序分别考察如下三种不同的反应顺序对抑制活性的影响。a、 抑制剂+底物37温育10min+酶反应20min碳酸钠终止反应测定b、 抑制剂+酶37温育10min+底物，反应20min碳酸钠终止反應测定c、 底物+酶37温育10min+抑

6、制剂，反应20min碳酸钠终止反应测定2.2.2.2 底物浓度选DNJ和拜唐苹为抑制剂以其-葡萄糖苷酶抑制率为指标，考察0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mmol/L這5个不同梯度的底物对抑制活性的影响2.2.2.3酶浓度选DNJ和拜唐苹为抑制剂，以其-葡萄糖苷酶抑制率为指标考察0.1、0.3、0.5、0.7、0.9u/mL5个不同浓度的酶对抑淛活性的影响。2.2.2.4缓冲液pH选DNJ和拜唐苹为抑制剂以其-葡萄糖苷酶抑制率为指标，分别考察不同pH6.6、6.8、7.0、7.2和7.4的缓冲液对抑制活性的影响2.2.2.5


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